Миелопролиферативные заболевания крови

Анализ миелопролиферативных заболеваний крови

Определение V617F мутации гена JAK-2 проводится при исследовании генетической предрасположенности к миелопролиферативным заболеваниям.Также анализ назначается при различных патологиях.

Исследование проводится методом ПЦР. Материалом для анализа служит венозная кровь. Рекомендуется сочетать определение полиморфизма гена JAK-2 с цитологическим и гистологическим исследованием тканей костного мозга.

Ген JAK-2 расположен в области короткого плеча 9-й соматической хромосомы. Ген кодирует белок JAK-2, участвующий в регуляции гемопоэза. Белок относится к семейству нерецепторных тирозинкиназ. Его функция заключается в передаче сигнала на рецепторы стволовых клеток костного мозга. При связывании цитокинов или факторов роста с рецепторами JAK-2 на мембране клеток, происходит активация JAK-2-киназ за счет их трансфосфорилирования. Запускается каскад последовательных реакций, вследствие которых в ядро клетки поступают сигналы о начале транскрипции тех или иных генов.

Замена гуанина на тимин в 14-м экзоне гена JAK-2 приводит к замене фенилаланина на валин в полипептидной цепи белка. Мутация является диагностическим маркером миелопролиферативных заболеваний, к которым относятся эритремия, сублейкемический миелоз, тромбоцитемия, первичный миелофиброз. Изменения нуклеотидной последовательности гена приводят к усилению сигнала JAK-2, вследствие чего стволовые клетки начинают усиленно делиться.

Полиморфизм гена JAK-2 ассоциирован с высоким риском возникновения тромбозов. Генетически обусловленная тромбофилия может длительное время протекать бессимптомно. Клинические признаки заболевания возникают только при образовании тромба. Тромбоз крупных артерий приводит к развитию ишемического инсульта и острой коронарной недостаточности. Тромбоз плацентарных сосудов выступает причиной выкидышей и внутриутробной гибели плода.

Мутация, возникшая в соматических клетках, не передается по наследству. В большинстве случаев носители мутантной аллели являются гетерозиготами.

Когда делают анализ

Определение мутации гена JAK-2 назначается в следующих случаях:

• при диагностике миелопролиферативных заболеваний,
• при дифференциальной диагностике истинной полицитемии и вторичного эритроцитоза,
• при определении вероятности развития тромбозов,
• при оценке риска самопроизвольного прерывания беременности,
• при подготовке к прохождению протокола ЭКО.

Мутация может возникнуть в течение всей жизни человека, поэтому при подозрении на заболевание системы крови рекомендуется сдавать анализ каждые 2-3 года.

Подготовка к анализу

Анализ от пациента не требует специальной подготовки. За несколько дней до сдачи крови рекомендуется прекратить прием лекарств. Также в этот период следует избегать значительных физических нагрузок и употребления алкогольных напитков. Анализ желательно сдавать в утренние часы натощак.

Важность исследования

Миелопролиферативные заболевания развиваются медленно и спонтанно. Но если не выявлять их на ранних этапах развития, развиваются множественные осложнения вплоть до летального исхода. Важно не только установить диагноз, но также выявить первичный повреждающий фактор. В большинстве случаев это мутация гена JAK-2. Если не провести молекулярно-генетическое исследование своевременно, могут развиться следующие осложнения:

• развитие самого миелопролиферативного заболевания, которое со временем будет прогрессировать;
• тромбоз крупных и мелких сосудов, что может привести к некрозу периферических тканей, инфаркту миокарда, инсульту, тромбоэмболии легочной артерии;
• вторичные инфекционные заболевания, которые значительно ослабляют иммунитет, могут поражать многие отделы организма;
• геморрагический синдром, то есть кровоизлияния под кожными покровами, которые могут возникать даже при минимальном механическом воздействии;
• анемия – снижение уровня эритроцитов, гемоглобина, железа, что приводит к бледности кожных покровов, учащению сердечных сокращений, падению артериального давления, усугублению сердечно-сосудистых патологий;
• осложнения во время беременности – привычное невынашивание плода, задержка развития плода, преждевременные роды на поздних сроках, отслойка или плацентарная недостаточность.

Наиболее опасным осложнением является кровотечение, повышенное тромбообразование. Причем такое отклонение может развиться внезапно, серьезно влияет на состояние здоровья. Если же держать отклонения под контролем, риск осложнений значительно снижается, в некоторых случаях их можно полностью исключить. Поэтому так важно своевременно проводить молекулярно-генетическое исследование, чтобы оценивать наличие или отсутствие дефектного гена JAK-2.

Для чего необходим анализ

Лабораторное исследование по выявлению дефектного гена JAK-2 требуется для выявления мутации, приводящей к патологическому состоянию в красном костном мозге, что впоследствии может вызывать онкологические патологии. Исследование необходимо для пациентов из группы риска, которые хотят завести ребенка. У таких больных высок риск патологий при самой беременности или для состояния плода. Анализ необходим для получения следующей информации:

• причина проявления негативной клинической симптоматики, которая чаще всего встречается при миелопролиферативных заболеваниях – неконтролируемое уменьшение массы тела, усталость, частые периоды повышения температуры тела, боли в животе, синяки на коже, отечность конечностей и лица, одышка, бледность кожных покровов;
• причина уже выявленного отклонения в составе крови, которое сопровождается изменением объема эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов;
• степень влияния негативного семейного анамнеза для развития миелопролиферативного заболевания, чтобы оценить риск патологии в будущем;
• составление правильного плана лечения с определением необходимости в назначении специальных препаратов, направленных на восстановление состава крови и предотвращение повышенной продукции клеток;
• подготовка к беременности естественным путем или через экстракорпоральное оплодотворение, чтобы исключить негативное влияние на женщину, процесс вынашивания, плод;
• причины уже проявившихся негативных состояний во время беременности, которые угрожают состоянию плода, могут привести к выкидышу или преждевременным родам;
• риск тромбоза или геморрагий у пациентов с миелопролиферативными заболеваниями или при подтверждении содержания дефектного гена JAK-2.

На основании данного исследования можно выявить лишь наличие или отсутствие содержания дефектного гена. Сам диагноз миелопролиферативного заболевания или различные патологии беременности устанавливают по другим анализам, клинической симптоматике, иным сведениям.

Метод диагностики

В целях обнаружения гена JAK-2 используют ПЦР диагностику. Для нее необходимо взять небольшое количество венозной крови, которую сразу же отправляют в лабораторию для дальнейшего исследования. Его проводят по последовательным этапам.

1. Создание образца для исследования. Биоматериал обрабатывают таким образом, чтобы получить взвесь из ДНК, подлежащей идентификации. Если генетический материал содержится в минимальном количестве, аппарат все равно сможет определить его структуру благодаря высокой чувствительности.
2. Денатурация. Эта процедура, во время которой разрушают молекулы, связывающие нити в цепочках ДНК. С этой целью температуру биоматериала повышают до 96°. В таких условиях цепочка раскручивается на отдельные нити, которые идентифицируют на основании следующих этапов.
3. Введение различных реагентов. Первоначально добавляют праймер, который идентифицирует участки ДНК. После этого добавляют ДНК-полимеразу. Это фермент, который стимулирует копирование нити ДНК большое количество раз. Причем копирование происходит до тех пор, пока не будет получено достаточное количество генетического материала, чтобы провести его оценку.
4. Изучение генетического материала. В первозданном виде ДНК исследовать невозможно, так как генетическая информация может содержаться в большом многообразии. Поэтому используют ДНК-зонд, который встраивается именно в те фрагменты, которые необходимо исследовать. После этого проводят идентификацию при помощи автоматического оборудования, которое выдает результаты по наличию или отсутствию патологического гена янус киназы.

В результате происходит распечатка бланка, где содержится информация по содержанию или отсутствию дефектного гена. Эти данные передают генетику, который проводит расшифровку и оценивает риск развития миелопролиферативных заболеваний. С этими сведениями дополнительно потребуется обратиться к онкологу, кардиологу, гинекологу или другому специалисту. Выбор врача зависит от степени влияния гена, проявления клинической симптоматики, наличия или отсутствия каких-либо заболеваний.

Расшифровка анализа

В лабораторном бланке результатов анализа содержится описание генотипа пациента по гену JAK-2. В некоторых случаях определяется аллельная нагрузка.