Определение HER2 статуса опухоли методом СISH

Определение статуса опухоли методом CISH в гистологии – лабораторный метод диагностики, направленный на идентификацию специфического гена в опухоли, в отношении которого действенны специфические методы терапии, полностью уничтожающие раковые клетки, но не затрагивающие здоровые ткани. Методику рекомендовано проводить в случае выявления новообразования в тканях молочной железы и желудка, так как при локализации опухоли в других органах такое лечение будет не эффективным. Это один из новых методов терапии, для которого предварительно требуется провести данное исследование для оценки возможности развития положительного эффекта.

Метод CISH рекомендуется проводить пациентам с диагнозом раковой опухоли молочной железы или желудка для получения полезной информации:

составление прогноза лечения раковой опухоли в случае применения таргетной терапии, которая подразумевает под собой препараты, избирательно влияющие на специфические белки атипичных клеток с целью их уничтожения, но не приводящие к поражению здоровых тканей;
оценка наличия или отсутствия дефектного гена HER-2, в результате формирования которого начинают выделяться атипичные клетки, вызывающие раковую опухоль (в большинстве случаев она представлена именно в тканях молочной железы и желудка, поэтому исследование рекомендуется проводить именно при поражении этих органов);
определение эффективности комплекса методов терапии, направленных на уничтожение раковой опухоли, в особенности при использовании препаратов против мутантного белка, находящегося в структуре атипичных клеток;
оценка необходимости назначения дополнительной гормональной терапии для устранения опухоли, локализованной в молочной железе, чтобы повысить шанс на полное устранение новообразования без развития осложнения в виде распространения атипичных клеток по системному кровотоку с последующим формированием метастазов.

Данный метод лабораторной диагностики не выявляет наличие или отсутствие опухоли. С этой целью предварительно назначают УЗИ, КТ, МРТ. После подтверждения дифференциального диагноза врачу необходимо подобрать специфические методы терапии. В первую очередь требуется удалить опухоль посредством хирургической методики. Однако даже после ее удаления в пораженных тканях или системном кровотоке могут остаться атипичные клетки. Для их полной ликвидации часто применяют таргетную терапию. Но она возможна только при наличии мутантного гена HER-2, в отношении которого действуют назначаемые препараты. Действующее вещество будет влиять только на эти гены, не вызывая поражение нормальных тканей. Поэтому такая терапия наиболее эффективна, но предварительно требуется подтвердить ее действенность через CISH- исследование.

Преимущества метода CISH

В отношении лабораторной методики CISH выделяют ряд особенностей, за счет которых выбирают это направление.

Применение более эффективного оборудования. Для оценки наличия или отсутствия патологического гена HER-2 используют разные виды лабораторных методов. В данном случае применяют современные и более эффективные микроскопы, чем для флюоресцентной системы.
Использование качественных реагентов. Разведенные реагенты сохраняют стабильность продолжительное время, поэтому у врача-лаборанта сохраняется возможность проведения лабораторного теста большое количество раз без порчи веществ.
Качество визуальной идентификации. Благодаря современным микроскопам выявляют не только патологический ген, но и его точное количество копий в ядре атипичной клетки.
Стабильное окрашивание. Созданные препараты окрашивают лабораторным красителем. В отличие от других методик на основе флюоресценции, в данном случае такие препараты сохраняют свое окрашивание продолжительно. Поэтому даже спустя некоторое время после его изготовления сохраняется возможность повторного исследования клеток через микроскоп. Например, это свойство можно использовать при потребности сравнения первичного и последующего результата анализа.

В первую очередь тест проводят для определения дефектного гена HER-2. Для этого не требуется применять световой микроскоп, но при этом достоверность теста сохраняется.

Когда назначают анализ статуса опухоли методом CISH?

Важно понимать, что в целях профилактики исследование не рекомендуется. Диагностика назначается только в том случае, если в ходе других лабораторно-инструментальных тестов была выявлена раковая опухоль внутри тканей молочной железы или желудка. Только затем проводят генетическое исследование при наличии следующих показаний:

подтвержденный диагноз рака молочной железы и желудка с целью определения дефектного гена HER-2 внутри атипичных клеток;
выявление основных критериев развития и лечения раковой опухоли – степень тяжести, прогноз развития заболевания, эффективность терапии (при наличии гена HER-2 таргетная терапия будет наиболее эффективной, в большинстве случаев приведет к полному уничтожению атипичных клеток, сохранившихся после хирургического вмешательства);
оценка потребности проведения таргетной терапии после хирургического вмешательства на случай сохранения злокачественных клеток (при проведении подобного лечения они полностью уничтожатся, поэтому возможность рецидива или распространения метастазов устранится);
определение необходимости применения гормонов для устранения опухоли молочной железы при наличии дефектного генов атипичных клетках;
определение точного содержания гена HER-2 в случае, если предварительно было проведено иммуногистохимическое исследование, но в ходе его выполнения не было получено однозначных данных.

Достаточно провести определение статуса опухоли методом CISH однократно, чтобы выявить наличие или отсутствие дефектного гена. В дальнейшем применяют другие лабораторно-инструментальные тесты, чтобы оценить результативность лечения.

Подготовка к исследованию

Перед сбором венозной крови пациенту необходимо пройти последовательные этапы подготовки для увеличения достоверности результата:

отсутствие применения любых тактик терапии до выполнения теста, чтобы при помощи анализа подобрать оптимальные тактики и не допустить влияния на ген HER-2;
запрет проведения инструментальных методов исследования, сопровождающихся облучением, так как оно влияет на состав крови (рентгенография, КТ, МРТ);
запрет употребления алкоголя за 1 день, а курения за несколько часов до сбора крови;
последний прием пищи должен осуществляться вечером накануне исследования, чтобы режим голода сохранился на протяжении 8 часов.

Врач заранее предупреждает о назначении даты для выполнения теста. С этого момента требуется придерживаться всех перечисленных этапов подготовки.

Как проводят исследование методом CISH

Как только образец биоматериала был собран, его доставляют в лабораторию, где исследуют при помощи пероксидазного теста:

первоначально получают небольшие фрагменты ткани опухоли;
подготавливают специальные зонды, на которых содержится антигенная метка;
добавляют реагент, в котором содержится фермент пероксидаза, она необходима для ускорения реакции хромогенных субстратов;
осаждение хромогена, затем расположение полученной пробы под микроскопом;
просмотр созданной пробы, в которой определяют наличие или отсутствие связавшихся комплексов (в отличие от других реакций, флюоресцентной метки нет, но комплексы обнаруживают по содержанию зонда).

Помимо обнаружения клеток с патологическим геном, можно определить их полную структуру. То есть врач просматривает форму и качество развития ядра, наличие или отсутствие внутренних органелл. За счет этого можно оценить степень упрощения атипичных клеток.

Расшифровка анализа

В процессе проведения хромогенной гибридизации in situ методом CISH можно получить два результата исследования по выявлению HER-2 гена:

наличие патологического гена, свидетельствующего о возможности применения таргетной терапии, при которой действующее вещество препарата избирательно влияет лишь на атипичные клетки, но не затрагивает здоровые ткани;
отсутствие выявления гена, вследствие чего лечение таргетной терапии противопоказано, оно не вызовет результата.

Если в ходе исследования были выявлены специфические метки, требуется учитывать не только их наличие, но и показатель среднего количества.