Определение статуса опухоли методом ISH

Оценка HER2-статуса пациента методом in situ hybridization (ISH)

Определение статуса опухоли методом ISH в гистологии – генетическая диагностика, посредством которой определяют пациентов из группы риска, у которых наблюдается рак желудка или молочной железы, чтобы составить правильный план лечения на основе таргетной терапии. Особенность данной диагностики заключается не только в постановке более точного диагноза, но и оценке эффективности таргетной терапии, так как она приносит результаты не при всех видах рака. На основе полученных сведений врач подбирает наиболее безопасные и эффективные методы лечения, чтобы полностью устранить распространение злокачественных клеток и предупредить рецидив.

Определение статуса опухоли методом ISH необходимо для получения следующей информации:

• оценка результативности таргетной терапии (использование препаратов, которые избирательно воздействуют лишь на белки, расположенные в злокачественных клетках, чтобы полностью уничтожить их без влияния на здоровые ткани) в случае, если у пациента диагностирована опухоль молочной железы или желудка;
• определение патологического гена HER-2 в образце венозной крови, который по своей структуре несет код белка, активирующего появление и размножение атипичных клеток (чаще всего этот ген выявляют при раке молочной железы и желудка, поэтому тестирование рекомендовано именно при этих формах опухоли);
• составление прогноза влияния назначаемых препаратов для борьбы с опухолевыми клетками (в данном случае определяют результативность применения специфического белка, избирательно действующего на клетки выявленной опухоли);
• определение потребности в назначении гормональной терапии в качестве одного из методов борьбы с раком молочной железы.

Важно понимать, что на основании этого исследования не выявляют саму опухоль молочной железы или желудка. Для этого используют другие лабораторно-инструментальные тесты, на основании которых можно подтвердить дифференциальный диагноз. Методика ISH же выполняется для подбора лучшего вида терапии, который позволит полностью купировать дальнейшее распространение атипичных клеток. В особенности это касается случаев, когда опухоль была извлечена посредством хирургического вмешательства, но требуется назначение таргетной терапии, чтобы устранить любые остатки атипичных клеток, которые могут спровоцировать повторное развитие новообразования или его метастазы в другие органы.

Цель исследования

Если у пациента выявлена опухоль желудка или молочной железы, недостаточно просто назначить хирургическое вмешательство, чтобы удалить его. Опасность злокачественной опухоли заключается в том, что атипичные клетки способны мигрировать в соседние ткани, кровоток, лимфу, дальше распространяясь по организму. Поэтому врачу требуется подобрать такую тактику лечения, которая позволит полностью предупредить угрозу. Цель оценки статуса опухоли через метод ISH заключена в выявлении генетической перестройки в опухолевых клетках посредством выявления специфической мутации HER-2. Чаще всего такая мутация происходит в раковых опухолях молочной железы и желудка, поэтому рационально проводить исследование именно в таких случаях.

Также выделяют и другие цели лабораторной диагностики:

• выявление возможности развития мутации с появлением гена HER-2, если другие диагностические тесты ее не определили;
• определение конкретного вида опухоли в случае, если другие методы лабораторно-инструментальной диагностики с более простой схемой выполнения не смогли установить точный диагноз;
• своевременное определение генетических отклонений на ранних этапах развития до перехода рака в 3 или 4 стадию, когда любые методы терапии будут уже не эффективны.

Исследование по определению статуса опухоли методом ISH назначает только онколог. Полученные результаты тоже должен интерпретировать именно этот врач. Тогда можно получить правильные и достоверные результаты, качественно оценить их и составить верную схему лечения. Это одна из важных целей диагностики.

В каких случаях проводят ISH-тест

Важно понимать, что данное исследование не проводят в профилактических целях, если у пациента отсутствует злокачественная опухоль. Его не применяют даже в тех случаях, если присутствует любая форма рака. Для его назначения должны присутствовать строгие показания:

• определение наличия патологического гена HER-2 у пациентов с диагностированным раком молочной железы или желудка;
• контроль и отслеживание течения злокачественного новообразования, чтобы оценивать степень тяжести патологии, составлять прогноз;
• подбор правильных методов терапии, которые могут быть основаны на хирургическом вмешательстве в совокупности с таргетной терапией, при которой вводят препарат, избирательно атакующий именно атипичные клетки;
• оценка потребности в дополнительной гормональной терапии при выявлении рака молочной железы только в случае, если выявлен ее HER-2 позитивный состав;
• предварительное получение неоднозначных данных по иммуногистохимическому методу исследования для оценки присутствия гена HER-2 в атипичных клетках.

Данное исследование проводят лишь однократно для выявления наличия или отсутствия патологического гена. По этим результатам назначают таргетную терапию. Важно понимать, что в дальнейшем это исследование не используют. Для контроля развития раковой опухоли или риске сохранения атипичных клеток после завершения терапии применяют другие лабораторно-инструментальные тесты.

Как подготовиться к анализу

На выявляемые показатели влияет минимальное количество факторов, но все же врачи советуют использовать следующие правила подготовки, чтобы не допустить малейшего влияния:

• проведение анализа еще до назначения методов терапии, чтобы сохранить в системном кровотоке максимальное количество атипичных клеток, в которых выявляют присутствие гена HER-2;
• рекомендация по отсутствию проведения рентгенографии, КТ, МРТ, УЗИ, физиопроцедур за 1 неделю до сбора крови (эти исследования и процедуры могут повлиять на состав крови, из-за чего появляется небольшой риск ложноотрицательных сведений);
• отказ от алкоголя за 1 сутки до теста;
• приход в кабинет медсестры для сдачи крови натощак, последний прием пищи должен быть за 6-8 часов до исследования;
• запрещено курить за 30-60 минут.

Исследование проводят планово, для него подбирают дату заранее. Поэтому врач предупреждает, что проводить подготовительные этапы необходимо всегда.

Метод исследования

В отличие от других методов гибридизации in situ, при исследовании ISH используют флуоресценцию. Тестирование проводят по последовательным этапам:

• взятие венозной крови из локтевой ямки в кабинете медсестры;
• размещение крови в пробирке, куда предварительно добавляют антикоагулянт;
• добавление разделительного геля, который провоцирует выделение плазмы в верхнюю часть пробирки (при отсутствии разделительного геля используют центрифугирование, вызывающее идентичный результат);
• перемещение небольшого количества плазмы в отдельную лунку планшета при помощи лабораторного шприца с одноразовым наконечником;
• добавление специфического реагента, в котором содержатся ДНК-зонды, на поверхности которых находится флюоресцентная метка;
• перемещение полученного образца в флюоресцентный микроскоп, под которым исследуется содержимое (в случае положительного результата под микроскопом будет выявляться специфическое свечение гена HER-2).

Тест является ручным, то есть лаборант самостоятельно оценивает и рассчитывает показатель. Он визуального просматривает все опухолевые клетки, оценивая наличие или отсутствие свечения, затем заносит эти данные в лабораторный бланк.

Расшифровка анализа

Для методики ISH выделяют следующую расшифровку:

• при отсутствии выявления специфического свечения под флюоресцентным микроскопом патологический ген не определяют;
• подтверждение амплификации при значении HER2/CEP17 ≥ 2, а также количестве копий гена HER2/neu ≥ 4.

Если присутствие патологического гена подтверждается, врач может назначить таргетную терапию. В этом случае она будет иметь высокую степень эффективности, что приведет к полному уничтожению малейших следов атипичных клеток, положительной динамике в терапии.