Анализ авидности антител IgG к Toxoplasma gondii

Анализ авидности антител IgG к Toxoplasma gondii является серологическим тестом, который позволяет определить стадию развития инфекции и давность заражения токсоплазмозом. Выявление высокоавидных антител подтверждает ранее перенесенную инфекцию, их низкий титр наблюдается при текущем инфицировании.

Авидностью IgG называется прочность связей, возникающих между антителом и антигеном. С течением времени такое сродство возрастает, благодаря чему можно выявлять низко- и высокоавидные антитела подкласса G. Сначала IgG обладают низкой авидностью, поэтому в течение первой недели заражения результат может быть отрицательным.

Toxoplasma gondii является внутриклеточным паразитом, который размножается в кишечнике кошек. Однако часть жизненного цикла он может провести и в организме человека, который заражается от инфицированного домашнего питомца. Токсоплазмоз протекает, как правило, без осложнений. Однако у лиц с иммунодефицитом возможно развитие нейрологических патологий.

На поверхности клеток токсоплазмы расположены антигены, по которым иммунная система человека распознает паразита и начинает продуцировать специфические иммуноглобулины. Эти антитела связываются с антигенами, нарушая целостность клеточной стенки, ввиду чего микроорганизмы погибают.

Общие сведения о Toxoplasma gondii

Протекание токсоплазмоза, как правило, происходит бессимптомно. В разных странах мира серологические исследования показывают переменную распространённость заражения (от 7,5 до 95,0 %). Основными путями передачи инфекции являются: употребление в пищу термически плохо обработанного мяса инфицированных животных, загрязнённых кошачьими фекалиями продуктов питания, зараженной воды, внутриутробная передача инфекции плоду от матери.

Токсоплазматическая инфекция иммунокомпетентных лиц является бессимптомным и самокупирующимся заболеванием. Тем не менее, заражение потенциально опасно в двух случаях: когда существует риск врождённого токсоплазмоза при заражении плода от матери во время беременности, и при диагностировании состояний глубокого клеточного иммунодефицита, в частности СПИД-инфекции, трансплантации, злокачественных опухолей, случаев, когда пациенты не могут обходиться без иммуносупрессивной терапии.

При первичном заражении токсоплазмозом во время первого триместра беременности инфицирование может привести к смертности развивающегося плода. Если передача инфекции происходит в последнем триместре беременности, болезнь может спровоцировать в первые два десятилетия жизни ребёнка врождённый хориоретинит.

У пациентов с иммунодефицитом заболевание может привести к церебральному или экстрацеребральному токсоплазмозу. Поэтому очень важно научиться различать острую и хроническую стадии инфекции, чтобы своевременно начать лечение и предотвратить возможные последствия во время беременности.

Поскольку инфекция развивается медленно и бессимптомно, любые признаки заражения (будь-то лихорадка либо паховая, латероцервикальная, подмышечная лимфаденопатия), имеют спокойное, доброкачественное течение. Сведения, собранные в ходе проспективных исследований, показывают, что частота и тяжесть течения врождённого токсоплазмоза определяются периодом, в который произошло заражение.

В течение первого триместра беременности заражение передаётся в 15-25 % случаев и может вызвать выкидыш или рождение мёртвого ребёнка. Инфекции второго триместра могут передаваться в 25-54 % случаев и вызывать гидроцефалию.

В результате ответной иммунной реакции организма на попадание возбудителя инфекции активированный клон «естественных киллеров» лимфоцитов производит продуцирование сперва иммуноглобулинов IgM, а чуть позже – IgG.

Вначале иммуноглобулинам IgG свойственна низкая прочность связей между антигеном и иммуноглобулином. В дальнейшем формирование иммунного комплекса происходит медленно (этот процесс может занимать от нескольких недель до нескольких месяцев) и смещается в сторону синтеза высокоавидных иммуноглобулинов класса IgG лимфоцитами.

Эти высокоавидные lgG антитела очень крепко соединяются со специфическими антигенами, в частности, весьма надёжно уничтожающими их. Высокое значение авидности IgG иммуноглобулинов обеспечивает исключение недавно перенесённого первичного заражения.

Значимость диагностики

Анализ на авидность IgG к возбудителю токсоплазмы позволяет установить, является ли инфекция недавней или заражение было в прошлом. Данное исследование очень эффективно в том случае, когда у пациентки оказался положительным тест на антитоксоплазменные иммуноглобулины IgM, которые являются маркером отслеживания предполагаемого периода заражения токсоплазмозом. Результат с низкой авидностью антител IgG означает недавнее инфицирование (с момента заражения прошло менее 4-х месяцев). Высокая авидность указывает на то, что инфекция произошла в более ранний период (более 4 месяцев назад).

Тест на авидность IgG измеряет силу связывания иммуноглобулинов, которая низка на ранней стадии после первичной инфекции и увеличивается со временем. Авидность иммуноглобулинов IgG может оставаться низкой в течение более длительного периода с момента инфицирования. У людей с иммунодефицитами во время беременности или реакцией на лечение антибиотиками подобная реакция может быть вариантом нормы. Таким образом, заражение T. gondii при беременности невозможно подтвердить лишь на основании низкой авидности IgG.

Медицинские показания к анализу

При наличии в крови пациента антител IgG к патогену токсоплазмы на фоне сомнительного или положительного результата обнаружения специфических иммуноглобулинов IgM рекомендуется проведение исследования на авидность иммуноглобулинов IgG. Разграничение недавнего и перенесённого в прошлом заражения токсоплазмозом является важным диагностическим критерием для корректного клинического ведения пациентов, перенёсших трансплантацию, и беременных женщин.

При получении ложных результатов анализа (показателей так называемой «серой зоны») достоверная интерпретация теста невозможна. В этом случае по истечении 2-х недель пациентам рекомендовано повторное лабораторное обследование.

Высокая авидность lgG антител к токсоплазме исключает первичное заражение токсоплазмозом в течение последних 4 мес.

ОБРАТИТЕ ВНИМАНИЕ! Случайное обнаружение низкоавидных иммуноглобулинов IgG не рассматривается как окончательное подтверждение информации свежего заражения, однако является вспомогательным подтверждающим критерием среди других серологических анализов, в т. ч. и клинико-анамнестических сведений. Наличие в крови новорожденных и младенцев в возрасте до 6 месяцев пассивно унаследованных антител IgG материнского генеза затрудняет расшифровку у них результатов теста на авидность иммуноглобулинов класса IgG. Кроме того, из-за очень низкой концентрации lgG антител у иммунокомпрометированных пациентов, особенно больных СПИДом, невозможно определить авидность антител к токсоплазме. В таких ситуациях врач назначает больному дополнительную диагностику на токсоплазмоз методом ПЦР.

Когда делают анализ

Изучение авидности антител IgG к Toxoplasma gondii рекомендуется врачом при:

нарастании симптоматики токсоплазмоза на фоне иммунодефитного состояния;
в рамках обследования беременных и планирующих беременность для определения риска первичного инфицирования;
определении срока возможного заражения.

Что важно знать перед подготовкой к исследованию?

Кровь для анализа следует сдавать утром натощак по истечении 6-8 часов с момента последнего приёма пищи.
Пить обычную столовую воду без газа и подсластителей разрешено.
Особенно важно перед процедурой воздержаться от пищевой перегрузки.

Как проводится анализ

Биоматериалом для проведения серологического анализа с вычислением индекса авидности IgG к возбудителю токсоплазмоза является сыворотка венозной крови. Для этого лаборант переносит кровь в пробирку, стенки которой обрабатываются предварительно разделительным гелем. Такая манипуляция стимулирует процесс отделения сыворотки от элементов плазмы, которые образуют осадок на дне пробирки.

Дальнейшее исследование проводят методом ИФА. В лунки планшета переносится биоматериал, также здесь на твердом носителе фиксируется белок токсоплазмы, который является антигеном. Если в сыворотке крови присутствуют антитела, сформируются иммунокомплексы. Для ослабления белковых связей и выявления низкоавидных антител в лунки добавляется мочевина. После этого лунки промываются, разрушенные иммунокомплексы удаляют.

На следующем этапе в лунки вносятся антитела, предварительно помеченные пероксидазой (субстрат - перекись водорода). В результате реакции окисляется хромоген, благодаря чему изменяется интенсивность окрашивания раствора. Чем выше авидность IgG, тем более ярким будет окрашивание. Степень окраски измеряется спектрофотометром, после чего сравнивается с эталонными значениями.

Одновременно проводится такой же анализ, только без использования мочевины. Полученные данные используются для расчета индекса авидности: концентрацию IgG до обработки мочевиной делят на концентрацию после добавления реагента.

Расшифровка анализа

Результаты анализа авидности антител IgG к Toxoplasma gondii выдаются в виде индекса авидности:

менее 0,3 - выявлены низкоавидные антитела, поэтому не исключено недавнее заражение;
от 0,3 до 0,4 - сомнительный результат, понадобится повторное проведение исследования;
более 0,4 - обнаружены высокоавидные антитела, инфицирование токсоплазмозом произошло более 4 месяцев назад.

Специфика проведения серологического скрининга на авидность lgG антител во время беременности

Диагностика у беременных авидности иммуноглобулинов lgG к Toxoplasma gondii с целью исключения риска первичного заражения осуществляется в соответствии со следующим алгоритмом:

1. Выявление во время первичного обследования антител IgG и IgM.

При отрицательном результате (когда IgG(-) и IgM(-)) можно говорить о наличии у пациентки стойкой иммунной реакции к возбудителю токсоплазмоза. В профилактических целях женщине рекомендовано единожды в каждом из триместров проходить данный скрининг. Когда в крови беременной выявлены антитела класса lgG на фоне отсутствия иммуноглобулинов lgM, результат диагностики говорит о возникновении сероконверсии, которая подтверждает наличие первичного заражения токсоплазмозом. В этом случае через 14 суток после проведения первичного скрининга женщине показано повторное обследование.

Отсутствие в организме беременной через 14-20 дней антител lgG и наличие антител lgM свидетельствует о возможном неспецифическом результате обследования.

При обнаружении у беременных антител обеих классов (IgG(+), IgM(+)) женщине дополнительно назначается тест на авидность.

2. Оценка авидности иммуноглоулинов IgG.

При низкой авидности IgG в период беременности не исключается риск первичного заражения токсоплазмозом, потому женщине назначается повторный анализ через 2 недели.

При высокой авидности IgG исключается вероятность раннего первичного заражения Toxoplasma gondii (за последние 12-16 недель).

МЕДИЦИНСКИЕ АНАЛИЗЫ

Авидность IgG к Toxoplasma gondii