АТ к бета-клеткам поджелудочной железы

Алексеев Андрей Викторович
Алексеев Андрей Викторович Врач клинической лабораторной диагностики,

Анализ на антитела к антигенам бета-клеток поджелудочной железы



Бета-клетки поджелудочной железыБета-клетки поджелудочной железы представляют собой ее островковый аппарат и отвечают за эндокринную функцию. Вырабатываемый клетками инсулин способствует усвоению тканями организма глюкозы крови. При его недостатке развивается инсулинозависимый диабет. Нехватка инсулина часто возникает из-за аутоиммунного процесса. В организме образуются антитела, которые ведут к деструкции бета-клеток поджелудочной железы. Чаще заболевание возникает из-за наследственной предрасположенности, но может быть вызвано и внешними факторами.

Антитела в крови могут обнаруживаться за несколько лет до первых симптомов диабета. Существуют антитела ко многим антигенам островковых клеток (АОК) и специфические - к инсулину, глутаматдекарбоксилазе и другие.

С помощью анализа можно определить предрасположенность к диабету и подтвердить диагноз при манифестации диабета 1 типа.


Антитела к бета-клеткам поджелудочной железы

Существуют различные аутоантитела против антигенов бета-клеток. Все эти антитела (АТ) подразделяют на две основные группы: тотальные аутоантитела к многочисленным антигенам клеток островков Лангерганса и специфические антитела к конкретным антигенам. В первую группу входят антигены островковых клеток (АОК). Их выявляют с помощью непрямой иммунофлуоресценции. Этот тип антител присутствует приблизительно у 70% пациентов с впервые диагностируемым диабетом первого типа. Среди здорового населения такие антитела обнаруживают всего в 0,1–0,5% случаев. Вторая группа представлена несколькими видами аутоантител: антитела к инсулину, к глутаматдекарбоксилазе, к фосфотирозинфосфатазе, к фогрину, к карбоксипептидазе H. Диагностическая ценность скрининга зависит от числа определяемых аутоантител: чем больше видов исследуется, тем выше чувствительность анализа. В ходе одного из многолетних проспективных исследований заболеваемости диабетом первого типа была выявлена оптимальная комбинация для определения прогноза заболевания. В нее входят антитела к островковым клеткам, инсулину и фосфотирозинфосфатазе.

Антитела к бета-клеткам поджелудочной железыАнтитела к инсулину относятся к классу IgG. Их обнаруживают у пациентов за несколько лет до клинического проявления сахарного диабета типа 1. Исследования показали, что именно этот тип АТ часто находят при сахарном диабете в раннем возрасте. Считается, что антитела к инсулину первыми указывают на начало аутоиммунной реакции. Их появление способствует синтезу остальных видов аутоантител к бета-клеткам. Для их определения в течение последних двух десятилетий использовались разные методики, в том числе методы, базирующиеся на РИА (радиоиммунном анализе) и ИФА (иммуноферментном анализе). За рубежом предпочтение отдается РИА-методам. Они применяются в крупных медицинских и научно-исследовательских центрах. Для этих жидкофазных аналитических методов характерны несколько преимуществ: формирование комплексов инсулина с антителами без неспецифического связывания, стремительное наступление равновесия реакции, устойчивость установившегося равновесия. Но РИА обладает и недостатками – это трудоемкое исследование, при котором существует необходимость использования радионуклидов.


Показания для анализа


Исследование назначается в следующих ситуациях:
  • Людям, имеющим родственников с диабетом 1 типа. Результаты позволяют судить о степени риска развития инсулинозависимой формы патологии.
  • Детям при наличии фенотипических признаков инсулинонезависимого диабета для уточнения типа заболевания и необходимости инсулинотерапии.
  • Детям до года при наличии симптомов диабета 1 типа для уточнения причины болезни. Дефицит инсулина может быть связан не с деструкцией островковых клеток, а с генетически обусловленным повышением порога их чувствительности к глюкозе.
  • Пациентам 35-45 лет с впервые выявленной гликемией для исключения медленно прогрессирующей аутоиммунной формы диабета, требующей назначения инсулина.
  • Обследование доноров при трансплантации фрагмента поджелудочной железы или почки.
  • При прогрессировании инсулинонезависимого диабета и подозрении на развитие абсолютной недостаточности инсулина.
  • Беременным с гестационной формой диабета для исключения истинного диабета 1 типа.
  • При обнаружении аутоантител к клеткам других органов, в частности, щитовидной железы, надпочечников.

Методика анализа


Забор крови из веныЗа день до анализа рекомендуется придерживаться обычного режима дня и питания, не употреблять алкоголь, избегать чрезмерных нагрузок, за 2 часа перед процедурой нельзя курить.Для анализа берется кровь из вены.

Антитела к антигенам бета-клеток (АОК, английский термин ICA) определяют, используя метод непрямой иммунофлуоресценции.


Определение антител с помощью ИФА

Иммуноферментный анализ – иммунологическая методика выявления антигенов и антител. При проведении исследования антигены и первичные антитела специфически взаимодействуют между собой. В результате реакции образуются комплексы. Их выявляют с помощью конъюгатов, являющихся вторичным антителами, объединенными со специальными метками – ферментами.

Конъюгаты можно получить при помощи поликлональных антивидовых или моноклональных антител против иммуноглобулинов того или иного класса. Существующие тест-системы способны обнаруживать разные типы антител: специфические АТ без дифференциации на классы или антитела, принадлежащие к определенному классу (IgG или IgM).

Применяют несколько типов ИФА-тест-систем:

  • Лизатные системы (применяются нативные антигены).
  • Рекомбинантные тест-системы, для которых с помощью генной инженерии получают аналоги антигенов.
  • Пептидные системы, субстратом которых являются фрагменты белков, получаемые химическим путем.

Постановка реакции для выявления антител проводится по определенной схеме. В лунки планшета помещают антиген, который затем инкубируют с испытуемым образцом (сывороткой). Если специфические антитела присутствуют в образце, они связываются с антигенами и образуют комплексы. Для оценки результата применяется спектрофотометрия.

ИФА имеет преимущества (если сравнивать с РИА):

  • Определение антител с помощью ИФАаналитическая процедура простая и безопасная;
  • для исследования требуется меньше времени;
  • можно определять иммуноглобулины разных классов;
  • тест высокочувствительный и позволяет выявлять антитела с концентрацией 0,05 нг/мл;
  • для постановки реакции применяются минимальные объемы исследуемого биоматериала;
  • реагенты длительно сохраняют стабильность (год и более);
  • существует возможность проведения качественного и количественного анализа;
  • способ относительно недорогой.

К недостаткам ИФА относится возможность получения ложноотрицательных и ложноположительных результатов. Ложноположительный ответ может объясняться присутствием антител при системных заболеваниях, при нарушении обмена веществ, вследствие приема лекарственных средств и в ряду других случаев. Ложноотрицательный ответ может быть получен из-за конкуренции между разными классами иммуноглобулинов и вследствие ошибок в ходе постановке реакции.


Интерпретация результатов анализа


Оценивают результаты анализа по титрам антител в сыворотке крови.

Референсные значения в разных лабораториях отличаются из-за оборудования:
  • титр меньше 4 - отрицательный результат;
  • титр равен 4 и выше - положительный результат.

Антитела к бета-клеткам выявляются у пациентов с недавно диагностированным диабетом 1 типа в 70% случаев. Положительный результат наблюдается также у людей с предрасположенностью к инсулинозависимому диабету. Чем выше показатель, тем значительнее риск развития заболевания. Положительный тест с частотой 0,1-0,5% наблюдается у здоровых людей.

Для уточнения диагноза рекомендуется проведение дополнительных исследований на содержание антител к специфическим антигенам клеток Лангерганса. Через некоторое время от начала болезни уровень выявляемых антител АОК начинает снижаться и спустя время результат анализа может стать отрицательным.

Анализ на антитела к антигенам бета-клеток помогает при диагностике диабета 1 типа, а также при выявлении предрасположенности к этому заболеванию. Это дает возможность подобрать адекватное лечение или принять своевременные меры профилактики, включающие диету и иммунотропную терапию. Положительный титр антител должен насторожить в плане риска развития других аутоиммунных состояний.