Антитела к кардиолипину

Аутоиммунные антитела к кардиолипину, по классам

Иммунологический анализ крови, позволяющий обнаружить нарастание уровня анти-кардиолипиновых иммуноглобулинов класса А, М и G проводится для оценивания вероятности развития тромбоэмболических осложнений и антифосфолипидного синдрома.
 
Кардиолипином называется сложный липид, содержащий фосфорную кислоту и соединенные с ней эфиры многоатомных спиртов. Данное вещество входит в структуру внутренней клеточной мембраны и присутствует в циркулирующей крови в составе липопротеидов.

При ряде аутоиммунных, инфекционных, злокачественных заболеваний в человеческом организме к кардиолипину вырабатываются специфические аутоиммунные антитела (Ig), обладающие высоким тромбогенным потенциалом. Активность анти-кардиолипиновых антител направлена к тромбоцитам и сосудистому эндотелию - аутоиммунный процесс вызывает их разрушение и приводит к развитию тромбозов и тромбоэмболических осложнений.

Определенный уровень данных антител может присутствовать в крови здорового человека, но его увеличение провоцирует формирование качественно-новой реакции гемостаза. Пациентов, у которых был обнаружен высокий уровень ауто-антител к кардиолипину, относят к группе риска по развитию тромбоза при различных патологических процессах. В период беременности из-за тромботических повреждений эмбриобласта и плаценты возможны отслойка «детского места», гипоксия и гипотрофия плода, выкидыш.

Когда назначают анализ

Методика проведения анализа

Определение антител к кардиолипину проводится с помощью непрямого твердофазного иммуноферментного анализа – ELISA. Используется планшет, ячейки которого содержат высокоочищенный кардиолипин. Для АТ к кардиолипину требуется кофактор β2-гликопротеин I, поэтому он внесен в лунки планшета. Это позволяет выявить антитела в независимости от эндогенного содержания вещества b2GPI. Анализ включает несколько этапов:

• связывание имеющихся аутоантител;
• формирование комплексов антигенов с антителами;
• ферментная реакция, сопровождающаяся окрашиванием, которое может быть оценено фотометрически.

В планшетные ячейки вносят предварительно разведенные образцы сыворотки и контроли. Имеющиеся в них иммуноглобулины реагируют с абсорбированными в лунках антигенами. После этого требуется 30-минутная инкубация, по окончании которой микроячейки промывают с целью удаления несвязавшихся компонентов сыворотки. Чтобы определить антитела, сформировавшие сэндвичевые комплексы с иммобилизованными в лунках антигенами, вносят раствор, содержащий конъюгаты анти-IgG, анти-IgM, анти-IgA с пероксидазой хрена. Далее проводят инкубацию в течение 15 минут, после чего промывочным раствором удаляют избыточный ферментный коньюгат. Затем в лунки вносят хромогенный субстрат и инкубируют еще 15 минут. На этом этапе раствор окрашивается в голубой цвет. Процесс окрашивания завершают добавлением стоп-раствора – соляной кислоты. Происходит изменение окраски: раствор становится желтым. По интенсивности окраски (оптической плотности) оценивается содержание антител к кардиолипину. Показатель прямо пропорционален содержанию аутоантител, имеющихся в образце и относящихся к иммуноглобулинам классов M, G, A. Данные теста могут оцениваться качественным и количественным способами.

Качественная оценка АТ к кардиолипину

В ходе описываемого теста непосредственно сравнивается оптическая плотность образца сыворотки пациента и оптическая плотность контролей. Если этот показатель в образце выше по сравнению с оптической плотностью контрольной сыворотки уровня среза (cut-off), результат оценивается как положительный. Варианты результатов:

• Отрицательный ответ: показатель оптической плотности исследуемой сыворотки меньше, чем контроля cut-off;
• Положительный ответ: определяемая оптическая плотность выше по сравнению с контролем cut-off;
• Сильноположительный результат – показатель оптической плотности сыворотки пациента выше или равен сильноположительному контролю.

Количественный анализ ELISA

С целью расчета количественных показателей теста на АТ к кардиолипину используются данные измерения концентраций и оптических плотностей контролей, на основании которых строится калибровочная кривая. Полученная кривая позволяет рассчитать концентрации антител в исследуемых образцах пациентов.

Интерпретация результатов анализа

Чувствительность маркера АТ к кардиолипину составляет примерно 70%, а его специфичность – 50%. При измерении суммарной концентрации иммуноглобулинов сразу трех классов (G, M, A) нельзя определить принадлежность антител к определенному классу. В случае присутствия в образце небольших концентраций аутоантител к кардиолипину двух или трех классов, результаты скринингового анализа могут быть положительными за счет суммирующего эффекта. При исследовании на определенные классы аутоантител образцы пациентов могут показать отрицательные результаты. Если скрининговый тест на аутоантитела к кардиолипину превышает нормальный показатель, то требуется тест типирования, определяющий иммуноглобулины отдельных классов IgG, IgM и IgA. Анализ осуществляется с помощью тест-систем для количественного определения антител классов G, M или A.

Существуют лабораторные критерии, подтверждающие диагноз антифосфолипидного синдрома. Они относятся к любому из трех компонентов, определяемому в течение 12 недель после манифестации клинических симптомов: волчаночный антикоагулянт, антикардиолипиновые антитела или антитела к β2-GPI. Антитела к кардиолипину класса G или M должны обнаруживаться не менее двух раз в течение 12 недель в высоких концентрациях (выше 40 GPL/мл или 40 MPL/мл).

Сравнительный анализ классов иммуноглобулинов показал, что титр антител класса G в большей степени соответствует клинической картине, чем титры АТ классов A и M. Эта особенность объясняется тем, что значения иммуноглобулинов классов M и A заметно больше подвержены колебаниям при воспалении, чем при других патологических процессах.