Антитела к нативной ДНК

Алексеев Андрей Викторович
Алексеев Андрей Викторович Врач клинической лабораторной диагностики,

Аутоиммунные антитела: АТ к нативной ДНК


Антитела к нативной ДНК
Нативной ДНК называют двуспиральную ДНК, сохраняющую водородные связи между матричными молекулами клеточного ядра. При развитии в организме аутоиммунных нарушений защитная система человека не способна различать собственные и чужеродные компоненты тканей, это явление провоцирует патологический иммунный ответ - выработку специфических антител, направленных против собственных фрагментов ДНК. Аутоиммунные антитела вызывают повреждение структуры клеточного ядра соединительной ткани различных органов и кровеносных сосудов, вызывая их воспаление и нарушение функциональной деятельности.

Обнаружение аутоиммунных антител к нативной ДНК необходимо для:
  • диагностирования, оценивания активности патологических аутоиммунных процессов;
  • мониторинга проводимой терапии системной красной волчанки;
  • клинического разграничения диффузных патологий соединительной ткани.

Антитела к двуспиральной ДНК (dsDNA) обнаруживаются у пациентов с системной красной волчанкой. Их распространенность в зависимости от активности болезни и методики исследования колеблется в пределах 40–90%. В некоторых случаях антитела к нативной ДНК выявляют при других аутоиммунных патологиях, при внутриклеточных инфекционных поражениях, воспалительных процессах и даже у здоровых лиц. Однако исследования показали, что обнаружение dsDNA-антител у клинически здоровых людей может свидетельствовать о риске развития болезни в ближайшие годы. Оказалось, что в 85% случаев у людей с антителами к dsDNA, не имеющих симптомов волчанки, заболевание развилось в течение пятилетнего периода после обследования.

Когда назначают анализ на антитела?


Опытные специалисты - терапевты, ревматологи, нефрологи, дерматологи назначают анализ крови для выявления антиядерных аутоиммунных антител при наличии у пациента:
лихорадки;
  • повышенной утомляемости;
  • суставной боли;
  • красных высыпаний на коже лица, груди или предплечий;
  • воспаления паренхимы легких (пневмонита);
  • воспалительного процесса в соединительнотканной сердечной оболочке (перикардита);
  • эпилепсии;
  • поражения почек.

Как определяют антитела к нативной ДНК?


Забор крови из вены
Биоматериал для анализа - кровь из вены, забор производится в лабораторном центре в утреннее время.

Накануне анализа крови на антитела к нативной ДНК пациенту необходимо:
  1. Исключить физические и психоэмоциональные перегрузки, прием спиртного.
  2. Ужинать не позже 20.00.
  3. Утром запрещено курить, пить чай и кофе, завтракать.
Анализ определения антител к нативной ДНК проводится с использованием метода проточной цитофлуори-метрии, основанной на проведении фотометрического и флуоресцентного измерения клеток крови при пересечении ними лазерного луча монохроматических каналов. Методика позволяет оценить размеры и внутренние структуры клеток (ядро, гранулированные элементы) и величину клеточной ДНК, проанализировать клеточные популяции. При выполнении исследования используется несколько флуоресцентных меток, позволяющих пропускать через лазерный луч волны света различной длины.


Особенности теста на АТ к двуспиральной ДНК

С помощью теста на dsDNA выявляют целый комплекс аутоантител к двухцепочечной ДНК. Эта группа антител является специфическим лабораторным маркером системной красной волчанки. Антитела в организме выполняют защитную функцию – они должны бороться с инородными материалами, такими как вирусы, бактерии, грибки, паразиты, но при этом быть толерантными к родным клеткам и тканям. В отдельных случаях может возникать патологический иммунный ответ, направленный против собственных белковых соединений. Он реализуется путем формирования специфических антител и приводит к развитию аутоиммунной патологии. При значительном повышении уровня иммуноглобулинов последние могут быть обнаружены при проведении анализа на dsDNA. Тест на антитела к двухцепочечной ДНК обладает высокой чувствительностью при системной красной волчанке, и при наличии соответствующей клинической картины позволяет подтвердить диагноз. Однако отрицательный ответ на антитела к двуспиральной ДНК не гарантирует отсутствие системной красной волчанки.

Особенности теста на АТ к двуспиральной ДНКДля классической формы волчанки с поражением внутренних органов, особенно для волчаночного нефрита и тяжелых форм заболевания, свойственны иммунокомплексный васкулит и антитела к нативной ДНК. При люпус-синдроме эти аутоантитела определяются у большинства пациентов (до 95% случаев). Антитела к антигенам в ядре клетки (к ДНК) запускают иммунологическое воспаление в первую очередь в мелких сосудах – в почках, синовии, коже, плевре, ЦНС. Именно эти антитела к dsDNA играют важную роль в механизмах формирования волчаночного нефрита, поскольку абсорбируются на почечной базальной мембране. В результате этого процесса развивается иммунокомплексный васкулит, специфичный для волчанки.

Методика исследования

Тест anti-dsDNA представляет собой иммуноферментный анализ для количественного определения иммуноглобулинов классов G, M и A к двуспиральной ДНК в плазме или сыворотке крови. Человеческую рекомбинантную двухцепочечную ДНК прививают к микроячейкам. В ходе исследования антитела к антигенам, имеющиеся в разведенной сыворотке, связываются с микроячейками. Несвязанные антитела удаляют путем промывания микроячеек. Иммуноглобулины классов G, M, A иммунологически взаимодействуют со связанными антителами, образуя комплекс, включающий конъюгат, антитело и антиген. После этого ячейки промывают для удаления несвязанного конъюгата. Количество связанного коньюгата оценивают с помощью энзимного субстрата и добавления кислоты. В результате реакции формируется конечный продукт желтой окраски. По интенсивности цвета, определяемой фотометрически, измеряется концентрация имеющихся в образце антител классов G, M и A.


Расшифровка анализа


Показатель нормы аутоиммунных антител к нативной ДНК -  от 0 до 3,9 МЕ/л - «отрицательный результат».

Концентрация специфических антител от 4,0 до 8,9 МЕ/л считается «сомнительным результатом» и свидетельствует об эффективном лечении и достижении ослабления течения аутоиммунного процесса.
Анализ на антитела к нативной ДНК
Результат свыше 9,0 МЕ/л является «положительным», наличие аутоиммунных антител к нативной ДНК характерно для:

Тесты по обнаружению антител к dsDNA, базирующиеся на методе ИФА, считаются традиционными. Однако они могут быть недостаточно специфичными из-за содержащейся в образцах примеси односпиральной ДНК. Поэтому в зависимости от результатов теста рекомендуется дообследование положительных образцов. Применяется следующий алгоритм: если получены пограничные результаты теста на антитела к нативной ДНК (30–40 МЕ/мл), требуется проведение дополнительного исследования антител к двухцепочечной ДНК методом иммунофлюоресцентного анализа на клетках Crithidia luciliae. С его помощью определяется уровень высокоаффинных антител к dsDNA. Проводимые тесты полезны не только для диагностики волчанки, но и для оценки развития и прогрессирования волчаночного нефрита и повреждений других внутренних органов. Наилучшей комбинацией для диагностики волчанки считается одновременное проведение высокочувствительного теста на ANA (антинуклеарный фактор) и высокоспецифичного теста на dsDNA.