Посев на грибы бронхиальный лаваж

Микробиологическое исследование отделяемого дыхательных путей бронхиальный лаваж

Посев на грибы бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) — это высокоинформативный микробиологический метод диагностики инвазивных грибковых инфекций нижних дыхательных путей и легких, таких как инвазивный аспергиллез, кандидоз и пневмоцистная пневмония.

Ключевые аспекты:

1. Кому нужно сдавать?
   Исследование критически важно для пациентов с онкологическими заболеваниями, получающих химиотерапию, реципиентов трансплантатов, больных с ВИЧ-инфекцией и лиц с длительной нейтропенией, у которых отмечаются прогрессирующие респираторные симптомы (лихорадка, кашель, одышка), не поддающиеся стандартной антибиотикотерапии.
2. Что выявляет?
   Обнаруживает и идентифицирует виды грибов в нижних дыхательных путях, определяет их концентрацию (КОЕ/мл) и чувствительность к противогрибковым препаратам (флуконазол, вориконазол и др.).
3. Зачем нужен?
   Анализ направлен на выявление патогенных грибов (Aspergillus spp., Candida spp., Pneumocystis jirovecii) в стерильной пробе жидкости, полученной при бронхоскопии, что позволяет подтвердить или исключить глубокий микоз у пациентов с иммунодефицитом.
4. Как проводится?
   Материал забирается во время бронхоскопии путем введения стерильного физиологического раствора в бронхи с последующей аспирацией (лаваж). Полученная жидкость отправляется в лабораторию для посева на специальные питательные среды.
5.  Нормы и отклонения:

Источники:

1. Г.А. Клясова, А.А. Масчан, А.В. Веселов Лечение инвазивного аспергиллеза легких (2018)

Подробнее об этом — ниже:

Посев на грибы (посев отделяемого дыхательных путей бронхиальный лаваж) – лабораторный метод диагностики, определяющий возможность содержания грибковых микроорганизмов в бронхиальном дереве. При исследовании одновременно определяют разновидность патогенных микроорганизмов, а также их чувствительность к фунгицидным средствам, чтобы полностью устранить патологию, предотвратив рецидив и распространение по респираторной системе. Биоматериал получают в клинике под контролем медицинского персонала. Только затем выполняют само исследование.

Для чего необходим анализ

Посев на грибы из отделяемого бронхиального дерева необходим для получения следующих данных:

• подтверждение или опровержение грибковой инфекции, а также выявление ее точной разновидности;
• дифференциальная диагностика между бактериальными и грибковыми микроорганизмами в бронхиальном дереве, так как от этих данных зависят назначаемые препараты;
• определение роста условно-патогенной микрофлоры или появление патогенных грибов;
• степень тяжести грибковой инфекции дыхательных путей, что зависит от патогенности и разновидности микроорганизмов;
• определение всего спектра фунгицидных препаратов, к которым выявленные грибы имеют низкую или высокую степень чувствительности (в некоторых случаях она может полностью отсутствовать, что исключает применение действующего вещества);
• определение эффективности уже проведенного лечения, чтобы судить о выздоровлении или потребности в применении еще одного препарата для купирования грибковой инфекции.

Исследование назначает лечащий врач – педиатр, терапевт, инфекционист, пульмонолог. Рекомендовано первоначально сдавать биоматериал для анализа, только затем приступать к лечению. Сразу после получения результатов методы терапии могут откорректировать.

Показания для анализа

Посев биоматериала из бронхиального лаважа на грибы проводят по показаниям:

• влияние негативных факторов, при которых присутствует высокий риск развития бронхолегочного аспергиллеза – иммунодефицит врожденного или приобретенного типа, новообразования, злокачественные процессы системы крови;
• сниженная функция иммунитета или иммунодефицит, что способствует развитию частых инфекционных процессов в бронхиальном дереве;
• тяжелые соматические заболевания, на фоне которых часто развивается инфекция респираторного тракта (например, сахарный диабет);
• продолжительное употребление некоторых лекарств, например, кортикостероиды, цитостатики;
• инфекция дыхательных путей, которая продолжительно не поддается терапии;
• отсутствие эффективности от курса антибактериальной терапии, так как она не влияет на грибок;
• эффективность противогрибковой терапии в процессе ее применения или после завершения всех методов.

Показания для анализа определяет лечащий врач, так как биоматериал получают инвазивным методом, проводимым только в условиях клиники.

Как подготовиться к анализу

Для сбора отделяемого бронхиального дерева необходимо выполнить бронхолегочный лаваж. Это инвазивная процедура, которая требует тщательной подготовки:

• отказ от употребления лекарств, которые запретил лечащий врач минимум за 7 дней до анализа (в особенности это касается антибиотиков, фунгицидов, антисептиков системного действия);
• последний период употребления пищи за 8 часов до исследования, сбор биоматериала проводят на голодный желудок;
• ужин перед процедурой должен быть легким, без содержания жирной, жареной, острой, копченой, чрезмерно соленой еды и фастфуда;
• исключение тяжелых физических нагрузок и сильного психоэмоционального стресса непосредственно перед исследованием;
• запрет распития алкогольных напитков за 1-2 дня;
• запрет курения в день сбора биоматериала.

Для прохождения процедуры обращаются в клинику, приходя в кабинет врача в строго указанное время. Недопустимо употреблять любое количество пищи. Также рекомендовано отказаться от питья воды за 3 часа. Если пациенту назначают повторное исследование, все перечисленные этапы подготовки повторяют.

Метод исследования

Первоначально собирают отделяемое из бронхиального дерева. Для этого выполняют процедуру бронхиального лаважа. Она предусматривает предварительное введение общей анестезии с последующим выполнением следующих этапов:

• предварительный подогрев физраствора;
• введение физраствора по порциям (максимально предусмотрено 5 порций);
• обратная аспирация жидкости из бронхиальных путей, которую выполняют для каждой порции (при этом важно соблюдать оптимальное давление, чтобы не допустить коллапса дыхательных путей);
• сбор полученной жидкости в стерильную емкость, чтобы проводить клеточный анализ.

Как только биоматериал будет получен, приступают к непосредственному посеву для выявления грибковой инфекции. Для этого придерживаются последовательных этапов.

1. Посев биоматериала на питательной среде. Подготавливают чашки Петри, в которые размещают питательную среду на основе агар-агара. Сверху заливают жидкость из бронхиального дерева равномерным и тонким слоем. На чашку устанавливают крышку. Подбирают температуру и влажность, чтобы стимулировать рост грибов. В таком состоянии биоматериал может простоять вплоть до 3-5 дней. Рост микрофлоры будет происходить всегда, так как в бронхиальном дереве содержится собственная микрофлора.
2. Приготовление микропрепаратов. Выросшие колонии микроорганизмов невозможно идентифицировать визуально. Предварительно приготавливают микропрепараты. Для этого используют стерильное предметное стекло. На его поверхность наносят выросшие колонии микроорганизмов. В таком виде их невозможно увидеть под микроскопом, так как клетки прозрачны. Поэтому предварительно проводят фиксацию при помощи спирта, затем наносят краситель, который окрашивает каждый грибок. После смывки красителя проводят сушку при естественных условиях, но отсутствии применения посторонних приборов. Таким методом выполняют подготовку 3-5 предметных стекол, чтобы изучить максимальное количество клеток.
3. Микроскопия. Каждый микропрепарат просматривают под микроскопом, оценивая состав микрофлоры. Выявляют точное количество условно-патогенных и патогенных грибов. Эти данные заносят в таблицу. В случае их выявления оценивают чувствительность к разным видам фунгицидных средств.
4. Определение чувствительности. Действующие вещества противогрибковых препаратов наносят на отдельные диски. Затем их размещают на поверхность питательной среды, где произошел рост грибковой микрофлоры. По истечению небольшого периода времени диски поднимают, оценивая степень уничтожения грибковой инфекции. Таким методом определяют отсутствие, среднюю или высокую степень чувствительности.

Как только исследование завершается, в таблицу лабораторного бланка вписывают все выявленные микроорганизмы, а также чувствительность каждого из них ко всем противогрибковым препаратам. Это позволяет подобрать оптимальный метод лечения с высоким результатом.

Расшифровка анализа

В норме при выполнении бронхиального лаважа количество грибковых микроорганизмов не должно превышать 104-105 КОЕ/мл. Это означает, что грибки могут присутствовать в небольшом количестве, но строго в пределах референсных значений. Если их количество увеличено, определяют чувствительность к противогрибковым средствам. В результате получают следующие данные:

• отсутствие чувствительности – действующее вещество препарата не уничтожает грибок, поэтому его применение недопустимо;
• средняя степень – препарат уничтожает часть инфекции, но оставшиеся микроорганизмы могут вызвать рецидив заболевания, из-за чего применять данное действующее вещество не рекомендуется;
• высокая степень – действующее вещество полностью уничтожает грибок, за счет чего его рекомендовано применять в качестве основного метода терапии.

На получение всех результатов может уйти вплоть до 1 недели. Сразу после заполнения лабораторного бланка их передают лечащему врачу, который назначает оптимальные виды терапии. Установку диагноза и выбор препарата выполняет только специалист, так как он учитывает все остальные факторы состояния здоровья пациента.