Фенотипирование эритроцитов

Анализ крови на эритроцитарные антигены

Фенотипирование эритроцитов (определение антигенов C, c, E, e, K) – лабораторный анализ, необходимый для своевременной оценки риска развития аутоиммунных процессов вследствие контакта антител во время беременности или при переливании крови. Метод используют для оценки степени реакции подобной системы для составления правильного прогноза и назначения адекватных методов терапии. В гемотрансфузиологии такое исследование проводится профилактически, чтобы полностью исключить переливание несовместимой крови. В гинекологии тест необходим для своевременного выявления риска резус-конфликта между матерью и плодом, назначения терапии, предупреждающей ответную реакцию иммунитета со стороны организма женщины.

Цель исследования

Основная цель фенотипирования эритроцитов заключается в выявлении совместимости крови у следующих пациентов:

• беременная женщина, у которой наблюдается отрицательный резус (резус-конфликт развивается на фоне положительного резус-фактора плода, который передается от отца);
• доноры и реципиенты крови при потребности гемотрансфузии, чтобы исключить любой риск гемолиза эритроцитов, который вызывает гемолитическую болезнь и летальный исход.

На основании этого исследования можно достичь следующих целей:

• оценка статуса иммунной системы беременных женщин с отрицательным резус-фактором, чтобы отследить пациентов из группы риска для развития резус-конфликта;
• потребность в назначении специфической терапии, направленной на предупреждение резус-конфликта, отторжение плода во время беременности;
• риск развития гемолитической болезни новорожденных детей в случае, если во время беременности наблюдались признаки негативной реакции со стороны организма женщины в отношении плода;
• подбор оптимальных методов терапии, направленных на предупреждение резус-конфликта во время беременности или гемолитической болезни новорожденного уже после его рождения;
• профилактическое обследование всех пациентов, которые сдают донорскую кровь, необходимую для переливания реципиентам;
• риск развития резус-конфликта в случае, если донорская кровь уже была введена в организм реципиента.

Если своевременно проводить данное исследование, возможность резус-конфликта у реципиентов после переливания крови отсутствует. При своевременном проведении теста для беременных женщин врач сможет подобрать оптимальные методы терапии, которые предупреждают резус-конфликт и гемолитическую болезнь новорожденных, сохраняют беременность. Это значительный шаг в современной лабораторной диагностике, необходимый для профилактики тяжелых осложнений беременности, не совместимых с жизнью плода.

Показания для анализа

Для назначения фенотипирования эритроцитов с определением антигенов C, c, E, e, K выделяют следующие показания:

• подготовительная процедура для переливания донорской крови к реципиенту, в особенности, если данный пациент периодически проходит процедуру переливания, что значительно повышает риск сенсибилизации организма с последующим развитием аутоиммунной реакции;
• профилактическое обследование беременных пациенток, если они имеют отрицательный резус-фактор, а муж положительный;
• оценка риска резус-конфликта в случае, если подобная реакция уже встречалась при предыдущей беременности, поэтому на данный момент необходимо определить потребность в назначении специфической терапии;
• подбор определенной донорской крови в случае, если у пациента имеются аутоиммунные патологии, резус-конфликт в анамнезе;
• выявление у женщин детородного возраста антител, направленных на антигены системы резус-фактора.

Обычно исследование проводят в лечебных целях. Профилактически оно назначается только для пациентов из группы риска, который рассчитывается исходя из анамнеза. На основании данного теста можно предположить любые осложнения, связанные с негативной реакцией иммунитета на фоне специфической реакции иммунитета против компонентов эритроцитов.

Как подготовиться к анализу

Исследование проходят только после предварительной подготовки, о которой предупреждает лечащий врач:

• последний прием пищи осуществляют за 8-10 часов до исследования, в кабинет медсестры приходят строго натощак (допустимо пить чистую и негазированную воду);
• за 1 неделю не проходят инструментальные методы диагностики, при которых на организм воздействуют даже малейшие дозы излучения (например, при рентгенографии, компьютерной томографии);
• за 1 сутки запрещено употреблять алкогольные напитки, заниматься активным спортом, подвергаться психоэмоциональному стрессу;
• щадящий ужин вечером накануне исследования, во время которого недопустимо пить газировку, сок, молоко, употреблять жирную и жареную пищу;
• за несколько часов до сбора крови не курят;
• непосредственно перед исследованием соблюдают покой, чтобы не допустить осложнений во время сбора венозной крови.

Все запреты можно устранить сразу после сбора крови. Рекомендуется позавтракать после процедуры, чтобы исключить головокружение и упадок сил.

Метод исследования

Для фенотипирования эритроцитов используют реакцию агглютинации. Это тест, основанный на взаимодействии антигенов и антител, в случае обнаружения иммунных комплексов врач оценивает наличие или отсутствие выпадения хлопьев в осадок, по которым определяют антигены системы резус-фактора. Для каждого антигена в отдельности реакцию проводят по этапам.

1. Обработка цельной крови для получения сыворотки. Биологическую жидкость берут одним из двух способов – через локтевую ямку или из капиллярной крови на пальце. Обычно используют первую методику, она более информативна. Для получения сыворотки необходимо прокручивание цельной крови в центрифуге или добавление разделительного геля. Вне зависимости от выбранного метода сыворотка выделяется в верхнюю часть пробирки, откуда ее берут лабораторным шприцем. Для каждого пациента в отдельности на шприц надевают одноразовый наконечник.
2. Подготовка разведенной сыворотки. Смешивают 0,2 мл сыворотки крови и 1,8 мл физраствора. Таким способом их соотношение получается 1:10.
3. Подготовка реагента. Для получения взвеси антигенов берут микробную эмульсию. Ее промывают раствором на основе агаровой культуры с дополнительным использованием физраствора. Для упрощения диагностики используют заранее подготовленный реагент.
4. Развернутая реакция агглютинации. В пробирке смешивают идентичный объем для физраствора и разведенной сыворотки. Затем полученную жидкость повторно смешивают с физраствором идентичным методом большое количество раз.
5. Проведение реакции. Оставляют последнюю пробирку после разведения при комнатной температуре до 20 часов, после чего отслеживают реакцию. О наличии специфических иммунных комплексов антиген-антитело свидетельствует выпадение хлопьев в осадок на дно пробирки.

Как только реакция завершается, ее оценивает врач-лаборант, записывая данные в бланк вручную. Их направляют только лечащему врачу, который проводит расшифровку результата.

Расшифровка анализа

В норме ни один из исследуемых антигенов не должен определяться в образце венозной крови. Даже малейшая концентрация антигена приводит к негативной реакции иммунитета, что может спровоцировать гемолиз эритроцитов с дальнейшими осложнениями. К последним относят отторжение плода, гемолитическую болезнь новорожденных или гемолиз эритроцитов у реципиента после переливания крови.

Наличие антигенов не всегда свидетельствует о том, что в ближайшее время разовьется специфическая иммунная реакция. Однако это показатель следующих сведений:

• отсутствие возможности переливания донорской крови реципиенту;
• потребность проведения специфической терапии, направленной на подавление реакции иммунитета у женщины для предупреждения выработки обильного количества антител, отторжения плода;
• потребность в лекарственной терапии, направленной на предотвращение гемолитической болезни у родившегося ребенка в случае, если у его матери был выявлен резус-конфликт.

Важно помнить, что риск гемолитической болезни значительно увеличивается в случае неоднократно проведения переливания крови или наличия предыдущей беременности, сопровождавшейся резус-конфликтом.