Тест Кумбса (прямой)

Прямой антиглобулиновый тест

Прямой тест Кумбса — это иммуногематологическое исследование, направленное на выявление антител (обычно IgG) и/или компонентов комплемента (C3d), фиксированных на поверхности эритроцитов пациента. Метод является ключевым диагностическим тестом при подозрении на аутоиммунные гемолитические анемии и другие состояния, связанные с иммунным разрушением эритроцитов.

Ключевые аспекты:

1. Что определяет? Тест выявляет наличие иммуноглобулинов и комплемента, связанных с мембраной эритроцитов в естественных условиях, что свидетельствует об активном иммунном процессе, направленном против собственных красных кровяных клеток.
2. Целевая аудитория? Пациенты с гемолитической анемией, новорожденные с гемолитической болезнью, реципиенты после гемотрансфузий.
3. Зачем необходимо? Исследование критически важно для дифференциальной диагностики аутоиммунных гемолитических анемий, гемолитической болезни новорожденных, лекарственно-индуцированного гемолиза и посттрансфузионных гемолитических реакций.

При выявлении анемии с признаками гемолиза (повышение ЛДГ, ретикулоцитоз, снижение гаптоглобина) необходимо выполнить прямой тест Кумбса для подтверждения иммунного характера гемолиза.

Источники:

1. The Direct Antiglobulin Test: Indications, Interpretation, and Pitfalls (2017)
2. Клинические рекомендации Минздрава РФ «Аутоиммунная гемолитическая анемия» (2020)

Подробнее об этом — ниже:

Тест Кумбса (прямой) – лабораторный метод диагностики, выявляющий антитела на поверхности эритроцитов в случае развития признаков гемолитической анемии аутоиммунного типа. Благодаря исследованию определяют антитела разных классов. Методику назначает терапевт, хирург, гематолог или другой специалист, который выявил признаки гемолитической анемии. Важно провести именно ее, чтобы дифференцировать точный тип анемии и назначить правильное лечение. Так можно предотвратить дальнейшее разрушение эритроцитов, стабилизировать уровень гемоглобина, предотвратить гипоксию.

Анализ проводят для получения следующих данных:

• дифференциальная диагностика различных видов гемолитической анемии, чтобы подтвердить аутоиммунную природу;
• подбор оптимальных методов терапии, которые устраняют выработку аутоиммунных антител;
• выбор правильной трансфузионной среды для введения в системный кровоток пациента;
• оценка донорских тканей, органов, клеток для пересадки, чтобы предупредить осложнения;
• оценка возможности развития гемолитических патологий различного типа;
• оценка возможности развития системных заболеваний соединительных тканей.

Лишь на основании пробы Кумбса проводят дифференциальную диагностику аутоиммунной гемолитической анемии. Но для изучения общего состояния больного назначают ряд вспомогательных исследований.

Суть прямой пробы Кумбса

В системном кровотоке каждого человека циркулируют эритроциты. Они необходимы для переноса гемоглобина и углекислого газа. Так происходит нормальный газообмен. Если в кровотоке появляются специфические антитела, которые вступают во взаимосвязь с эритроцитами, происходит разрушение клеток. Это приводит к резкому снижению уровня эритроцитов, гипоксии, риску летального исхода. Благодаря прямой пробе Кумбса выявляют не просто наличие гемолитической анемии, а ее точную причину в виде образования аутоантител. Важно выявить именно эту реакцию, так как для подобного заболевания существуют специфические методы лечения, которые останавливают дальнейшую выработку антител.

В ходе исследования применяют антиглобулиновую сыворотку, которая связывается именно с иммуноглобулинами на поверхности эритроцитов. Реагент не входит во взаимосвязь с другими типами антител, поэтому реакция является специфической. Как только произошло образование комплексов антиген-антитело, эритроциты выпадают в осадок. Его наличие в виде реакции агглютинации является показателем содержания антител на поверхности эритроцитов. Это указывает на гемолитическую анемию аутоиммунного типа и требует лечения.

В каких случаях проводится прямой тест Кумбса?

Прямой тест Кумбса проводят только при наличии прямых показаний:

• негативная клиническая симптоматика, указывающая на развитие гемолитической анемии аутоиммунного типа – бледность кожных покровов, хроническая усталость, обмороки, круги под глазами;
• выявление причины отклонений в других лабораторных анализах – увеличение непрямого билирубина, уменьшение гемоглобина, снижение уровня эритроцитов, увеличение лактатдегидрогеназы, повышенная продукция ретикулоцитов, лейкоцитов и скорости оседания эритроцитов;
• отслеживание динамики развития аутоиммунной гемолитической анемии;
• оценка эффективности лечения аутоиммунной гемолитической анемии;
• профилактическое отслеживание состояния эритроцитов в случае, если у пациента наблюдается период ремиссии.

При выявлении патологии сразу назначают лечение для предупреждения дальнейшего разрушения эритроцитов и восстановления показателей крови. С этого момента периодически повторяют пробу Кумбса, чтобы отследить показатель в динамике.

Как подготовиться к анализу

Перед сбором крови для проведения гематологического исследования проводят следующие этапы подготовки:

• контроль лекарственной терапии с исключением действующих веществ препаратов, вызывающих влияние на систему крови или иммунитета (например, для подтверждения истинной аутоиммунной природы гемолитической анемии недопустимо использовать глюкокортикостероиды в системном виде);
• последний период употребления пищи вечером накануне исследования, так как образец крови сдают утром натощак;
• употребление стандартного объема воды даже в период голода перед исследованием;
• исключение психоэмоциональной и физической перегрузки за несколько дней;
• отказ от проведения инструментальных методов диагностики перед сбором крови, что особенно касается рентгенографии, МРТ, КТ и иных процедур с облучением;
• запрет распития алкогольных напитков за 1 сутки;
• отказ от курения за 30-40 минут.

Для некоторых пациентов потребность в предварительной подготовке исключается. Например, это касается экстренных случаев, когда гемолитическая анемия приводит к разрушению множества эритроцитов, что угрожает состоянию здоровья или жизни. Тогда тест проводят незамедлительно, учитывая возможность влияния внешних или внутренних факторов.

Метод исследования

Для гематологических исследований используют антикоагулянт, который предотвращает образование тромбоцитарного сгустка. В таком виде образец переносят в лабораторию, где приступают к выполнению пробы Кумбса.

1. Сбор образца венозной крови. Используют цельную венозную кровь, которую размещают в стерильную пробирку с добавлением антикоагулянта. Соблюдают условия дезинфекции, чтобы внутрь тканей и непосредственно в кровь пациента не попали посторонние микроорганизмы и вещества.
2. Реагент для очищения. Кровь очищают от посторонних компонентов для сохранения взвеси эритроцитов, на поверхности которых определяют наличие или отсутствие антител.
3. Добавление антиглобулиновой сыворотки. Она вступает во взаимосвязь только с антителами на поверхности эритроцитов, образуя иммунные комплексы. Сразу после добавления реагента ожидают не более 3 минут, чтобы выявить наличие изменений.
4. Оценка изменений. В норме каких-либо отклонений в состояние крови наблюдаться не должно. Если происходит патология аутоиммунного типа, формируется осадок в виде хлопьев. Это реакция агглютинации, которая происходит на фоне взаимодействия антиглобулиновой сыворотки и антител на поверхности эритроцитов. Подобная реакция указывает на их наличие, что и является причиной повышенного разрушения эритроцитов.

Исследование быстрое, его выполняют в течение нескольких часов, поэтому быстро передают результаты пациенту. По полученным данным можно в точности судить о наличии или отсутствия антител на поверхности эритроцитов, чтобы подтвердить или опровергнуть диагноз аутоиммунной гемолитической анемии.

Расшифровка анализа

В ходе развития аутоиммунной гемолитической анемии на поверхности эритроцитов могут появляться антитела различных видов:

• IgA;
• IgG;
• IgM;
• C3-компонент системы комплимента;
• C3d-компонент системы комплимента.

В норме ни одних перечисленных антител на поверхности эритроцитов присутствовать не должно. Если они образуются внутри их структуры, это может стать причиной гемолиза, то есть обильного разрушения клеток крови. Если они не выявлены, но гемолиз сохраняется, необходимо искать другую причину развития болезни.

В случае обнаружения положительного результата в виде агглютинации эритроцитов при прямой пробе Кумбса немедленно приступают к терапии. Причиной подобного отклонения могут быть следующие состояния:

• переливание крови донора реципиенту без предварительного обследования биологической жидкости в виде типирования;
• эритробластоз новорожденных детей;
• разрушение эритроцитов на фоне употребления некоторых видов лекарственных средств;
• аутоиммунная гемолитическая анемия первичного или вторичного типа;
• некоторые виды системных аутоиммунных патологий, которые могут приводить к осложнению в виде аутоиммунной и гемолитической анемии (системная красная волчанка, пароксизмальная холодовая гемоглобинурия, макроглобулинемия Вальденстрема);
• злокачественные процессы в системном кровотоке, например, при лейкозе или лимфоме;
• инфекционный мононуклеоз;
• заражение бледной трепонемой;
• пневмония на фоне заражения микоплазмы;
• сифилис.

Точную причину аутоиммунной гемолитической анемии можно установить на основании дополнительных лабораторно-инструментальных тестов.