Mycoplasma spp. (ПЦР мокрота)

ПЦР анализ мокроты на Mycoplasma spp.

Анализ мокроты с помощью метода ПЦР диагностики позволяет обнаружить фрагменты генетического материала Mycoplasma spp. и проводится для диагностирования микоплазменной инфекции.

Mycoplasma species представляют собой мельчайшие микроорганизмы, способные паразитировать в клетках эпителиального слоя полости рта, глотки, верхних дыхательных и мочеполовых путей. На сегодняшний день известно более 100 типов данных микробов, 7 их них вызывают в человеческом организме различные патологические процессы:

• респираторные заболевания;
• атипичную пневмонию;
• высыпания на кожных покровах;
• ревматоидный артрит;
• воспаление тазовых органов.

Некоторые типы Mycoplasma spp. обнаруживают в злокачественных клетках. Это явление объясняется тем фактом, что современными исследователями было доказано, что у клеток, инфицированных микоплазмами, изменяется морфологическое и генетическое строение. В результате чего происходит чрезмерная активация некоторых обычных генов и их превращение в онкогены.

Для выявления наличия в организме пациента Mycoplasma species практикующие специалисты используют результаты бактериологического посева, серологического скрининга и цитогенетического тестирования.

Когда делают анализ

Проведение ПЦР анализа мокроты на Mycoplasma spp. необходимо при:

• диагностировании микоплазменной инфекции;
• клиническом разграничении заболеваний с похожими симптомами;
• установлении этиологической причины воспалительного процесса в дыхательном тракте;
• оценивании эффективности проведенного курса антибактериальной терапии.

Важность исследования

Требуется выявить микоплазменную патологию на ранних этапах развития при помощи лабораторной диагностики. Важность исследования заключается в получении следующей информации:

• наличие или отсутствие Mycoplasma spp в исследуемом биоматериале, в данном случае это мокрота;
• оценка степени распространения микроорганизма (чем больше его определяется, тем сильнее инфекционный процесс);
• дифференциальная диагностика между микоплазмой или любой другой инфекцией, которая способна вызывать схожие симптомы поражения дыхательной и мочеполовой системы;
• оценка риска распространения инфекции перед планированием беременности, так как передача паразита ребенку во время родов может привести к тяжелым заболеваниям;
• выявление потребности в назначении антибиотиков, к которым Mycoplasma spp имеет чувствительность (препараты назначают только при доказанной инфекции, в профилактических целях их не применяют);
• определение результата лечения в процессе применения препаратов или после полного завершения всех методик, чтобы судить о результате и своевременно подбирать тактики терапии при низкой эффективности;
• контрольное отслеживание пациентов, у которых ранее в анамнезе была выявлена и вылечена инфекция Mycoplasma spp (бактерия входит в условно-патогенный спектр, поэтому может присутствовать в небольших количествах, выявление ее обильного распространения – показание к терапии).

Обычно Mycoplasma spp не провоцирует инфекционно-воспалительный процесс, если содержится в минимальных концентрациях. Но если на пациента действуют внешние или внутренние повреждающие факторы, она начинает активно делиться и распространяться вглубь тканей. При подозрении инфекционно-воспалительного процесса требуется своевременно выполнить ПЦР-диагностику, чтобы в короткие сроки начать лечение. В отличие от других исследований, результаты приходят быстро, поэтому можно сразу начинать прием препаратов.

Для чего необходим анализ

ПЦР диагностику на факт наличия бактерии Mycoplasma spp допустимо проводить в профилактических целях или вследствие проявления негативных симптомов. Если заражение или непосредственно инфекционно-воспалительный процесс выявлен на ранних этапах благодаря анализу, можно избежать следующих осложнений:

• проникновение инфекции вглубь мочевыделительной системы, что может спровоцировать воспалительные процессы во внутренних органах с риском развития бесплодия;
• проникновение инфекции по респираторной системе, что может спровоцировать бронхит и пневмонию, ухудшающую поставку кислорода в кровоток (развивается гипоксия внутренних органов, дыхательная недостаточность);
• распространение инфекции во внутренние органы и ткани – менингит, неврит, артрит, полиартроз, миокардит, перикардит, плеврит, пиелонефрит и многие другие;
• внутриутробное заражение плода или передача инфекции ребенку во время рождения (перенос микроорганизма вертикальным путем).

Цель ПЦР диагностики – определение следующей информации:

• наличие или отсутствие Mycoplasma spp в исследуемом биоматериале (мокрота);
• наличие выявленного микроорганизма в пределах нормы или в повышенных значениях.

Так как микоплазма относится к условно-патогенной микрофлоре, важно выявить именно ее количество, чтобы судить о возможности развития воспалительного процесса за счет ее активного размножения.

Этапы подготовки к анализу

Биологическим материалом является образец мокроты, собрать его можно в домашних условиях. Лучше всего секрет трахеобронхиального дерева отходит утром, именно в это время и следует отбирать биоматериал для анализа ПЦР.

Накануне процедуры пациенту необходимо:

1. Заранее подготовить специальный стерильный контейнер, который можно приобрести в аптечной сети.
2. В течение суток принимать отхаркивающие средства, которые усилят образование мокроты.
3. После пробуждения (до очищения зубов, приема воды и пищи) выполнить следующие действия: прополоскать полость рта кипяченой водой; тщательно откашляться, сплюнуть мокроту в емкость и плотно закрыть ее крышкой.
4. Промаркировать полученный образец и доставить в лабораторный центр.

Для выполнения исследования используют методику полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Основными ее преимуществами являются отсутствие ложно-позитивных результатов и сокращение срока обработки исследуемого образца – итоговые данные можно получить через 60 минут.

На содержание Mycoplasma spp в мокроте могут повлиять многие факторы, поэтому требуется исключить некоторые из них:

• составление списка принимаемых лекарств в данный момент, который передают лечащему врачу, чтобы исключить препараты, влияющие на состав микрофлоры мокроты (обычно это антисептики и антибиотики, употребляемые перорально, ингаляционно, внутривенно и перфузионно);
• запрет приема любых новых лекарств за 5-7 дней до сдачи анализа, если о них не был предупрежден врач;
• сбор мокроты при отсутствии предварительного употребления жидкостей, поэтому для этих целей предпочтительнее утреннее время;
• запрет употребления алкогольных напитков за 1 день.

Так как пациент должен собирать мокроту самостоятельно, ему необходимо предварительно купить стерильный контейнер в аптеке. Мокроту откашливают внутрь емкости, затем плотно закрывают крышкой, чтобы внутрь не попадали посторонние микроорганизмы и вещества.

Особенности исследования

Для ПЦР диагностики по выявлению Mycoplasma spp характерны следующие особенности:

• даже если собрано небольшое количество мокроты, это не помешает исследованию, так как для теста достаточно минимального объема образца;
• после сдачи биоматериала результаты приходят через 1-2 дня, тест проводится быстро;
• благодаря исследованию выявляют микроорганизмы, содержащие разный генетический материал – ДНК, РНК;
• при обнаружении Mycoplasma spp в мокроте посредством ПЦР исследования дополнительно рекомендуется оценить ее наличие в выделениях мочеполовых путей.

Анализ не инвазивный, сбор биоматериала не приносит вреда для пациента. Поэтому его можно проводить многократно, особенно при назначении продолжительной терапии.

Метод проведения анализа

Мокроту отправляют в лабораторию, где выполняют последовательные этапы ПЦР диагностики:

• подготовка пробирок с амплификатором, куда перемещают небольшое количество мокроты;
• воздействия высоких и низких температур на образец, чтобы разрушать взаимосвязь в нитях ДНК, они должны располагаться отдельными цепочками;
• добавление праймера, который встраивается в нить ДНК, чтобы дальнейшие реакции проходили именно в этой области;
• добавление ДНК-полимеразы, которая многократно увеличивает количество выделенного фрагмента ДНК;
• идентификация полученного биоматериала, чтобы выявить его принадлежность к определенному микроорганизму.

В конце исследования произойдет распечатка бланка, где будет указано наличие или отсутствие Mycoplasma spp, ее точный объем.

Расшифровка анализа

Результат «Mycoplasma spp. не обнаружены» считается отрицательным и свидетельствует об отсутствии у пациента микоплазмоза. Положительный результат анализа подтверждает наличие микоплазменной инфекции.