Mycobacterium tuberculosis (ПЦР моча)

ПЦР диагностика мочи на Mycobacterium tuberculosis

Выявление ДНК Mycobacterium tuberculosis (палочки Коха) в моче больного проводится методом ПЦР. Эта методика основывается на обнаружении звеньев генома возбудителя заболевания в биоматериале и его копирование (репликация) посредством циклического деления до тех пор, пока сформируется полимер, с помощью которого удастся определить видовую принадлежность патогена.

Инфицирование Mycobacterium tuberculosis происходит преимущественно воздушно-капельным путем во время контактирования с больным. Как правило, поражаются легкие с развитием туберкулеза открытой или закрытой формы. Однако при тяжелых иммунодефицитных состояниях возможно поражение других органов и формирование генерализованной внелегочной формы туберкулеза.

Когда делают анализ

Основными показаниями к проведению анализа мочи на Mycobacterium tuberculosis методом ПЦР являются:

• диагностирование туберкулеза почек, мочеточников, мочевого пузыря;
• дифференциальная диагностика болезней мочеполовых органов хронического течения с внелегочными формами туберкулеза;
• определение типа микобактерии для подбора максимально эффективной противотуберкулезной терапии;
• у детей обнаружена аномальная реакция на пробу Манту;
• заболевание сопровождается бактериемией с лихорадкой, истощением, тяжелым поражением внутренних органов;
• иммунодефицитные состояния.

Методика проведения анализа

Изучению подлежит порция утренней мочи, собранная в специальный стерильный контейнер.

Правила сбора мочи:

1. Подмываться перед процедурой не следует, гигиенические процедуры проводятся вечером накануне анализа.
2. Интравагинальное спринцевание запрещено перед сбором мочи.
3. Женщинам нежелательно сдавать мочу на анализ во время менструации, поскольку результаты исследования могут быть не точными.
4. Запрещен прием антибиотиков, противомикробных препаратов накануне обследования.
5. По возможности рекомендуется прервать прием противотуберкулезных средств.
6. Рекомендуется воздержаться от мочеиспускания около двух часов перед сбором мочи.

Обнаружение микобактерий в моче полимеразной цепной реакцией предполагает выявление ДНК и копирование определенного фрагмента генома, что возможно даже при минимальной концентрации патогена в биоматериале. Для этого мочу пипеткой переносят в пробирки амплификатора. Этот прибор обеспечивает циклическое нагревание и охлаждение содержимого.

На первом этапе в результате нагревания биоматериала до 95 градусов происходит денатурация водородных связей. После этого образец охлаждается и вносится праймер, который прикрепляется к определенному участку генома.
Через 5 минут добавляется ДНК-полимераза, катализирующая каскадное копирование выделенного фрагмента. Полученную копию звена генома сравнивают со стандартизованными образцами, благодаря чему возбудителя инфекции можно точно идентифицировать.

Расшифровка анализа

Нормальным считается результат, при котором в моче отсутствуют любые бактерии, включая палочку Коха.

Обнаружение фрагментов ДНК бактерии Mycobacterium tuberculosis указывает на развитие туберкулеза. Такой результат является положительным. Рекомендуется сдать анализ мочи повторно через 10 дней.