Микоплазмоз (ПЦР спермы)

ПЦР диагностику спермы на Mycoplasma spp.

Микоплазмами называют мельчайшие паразитарные или сапрофитные бактерии, не имеющие клеточной стенки (что делает их нечувствительными к антибиотикам пенициллинового ряда). Микробиологам известно около ста видов микроорганизмов этого семейства, семь из них при определенных обстоятельствах могут вызвать в организме человека различные патологические процессы.

Mycoplasma species населяют женские и мужские урогенитальные органы, инфицирование происходит при незащищенной интимной близости. Исследователями достоверно доказано, что микоплазменная инфекция может привести к воспалительной реакции в урогенитальном тракте, нарушению продукции эякулята и развитию мужского бесплодия. Обнаружение генетического материала (ДНК) бактерии в сперме с помощью методики ПЦР имеет высокое диагностическое значение. Данное молекулярно-биологическое исследование позволяет выявить инфицированность мужчины Mycoplasma spp.

Симптомы микоплазмоза

Микоплазмы часто являются причиной (около 30% случаев) воспаления мочевыводящего канала - уретрита негонококкового происхождения. Инфекционно-воспалительный процесс затрагивает всю уретру.

Клиническими признаками микоплазмоза является наличие у пациента:

• патологических выделений из пениса;
• покраснения и зуда около отверстия уретрального канала;
• дискомфорта в зоне мошонки;
• болевых ощущений при интимном контакте;
• жжения при мочеиспускании.

Важность исследования

Микоплазма spp. распространяется половым путем, именно поэтому у мужчин ее выявляют в сперме. Если своевременно не провести исследование и не пройти лечение, могут возникнуть следующие осложнения:

• бесплодие вследствие воспалительного процесса, приводящего к спайкам семявыводящих путей;
• дефект сперматогенеза;
• простатит – воспалительный процесс в простате с риском фиброза или аденомы;
• уретрит – воспаление в уретре, которое приводит к сужению ее просвета, что вызывает затруднение мочеиспускания, осложнение бактериальной инфекцией, воспаление в мочевом пузыре;
• колликулит – воспаление семенного бугорка;
• везикулит – воспаление семенных пузырьков;
• пиелонефрит – бактериальная инфекция почек на фоне застоя мочи или перемещения инфекции вверх по мочевыделительным путям.

Для предупреждения осложнений требуется своевременно обратиться к врачу. Большинство урологов советуют проходить тест в профилактических целях, даже если признаки отсутствуют. Врачи рекомендуют ПЦР исследование для точного выявления микроорганизма, так как при использовании других анализов риск получения ложных сведений выше.

Для чего необходим анализ

ПЦР анализ по выявлению микоплазмы spp. необходим для получения следующей информации:

• наличие или отсутствие микоплазмы spp.  в мочеполовой системе, а именно в сперме;
• выявление микоплазмоза в хронической стадии, который не вызывает негативных симптомов, но поражает половую систему;
• оценка причин негативной симптоматики;
• составление правильной схемы лечения, так как микоплазма обладает чувствительностью к определенным видам антибактериальных средств;
• оценка потребности назначения микробиологического исследования, чтобы более качественно провести терапию или в случае, если эффект от первоначально назначенных лекарств не дает результата;
• определение эффекта проведенного лечения, в случае положительного результата концентрация микоплазмы spp. значительно снижается или полностью отсутствует (микроорганизм может содержаться в условно-патогенной микрофлоре, поэтому присутствие минимальной концентрации не свидетельствует о патологии).

Исследование чаще назначает лечащий врач. Но также его может пройти пациент самостоятельно, чтобы в профилактических целях отследить состав биоматериала, выделяемого из половых путей.

Показания к анализу спермы на микоплазмоз

Для назначения анализа выделяют следующие показания:

• негативная симптоматика, по которой можно заподозрить половую инфекцию (при этом признаки будут не специфичные, так как многие микроорганизмы вызывают схожие отклонения);
• бесплодие, чтобы выявить причину продолжительного отсутствия зачатия;
• подготовка к зачатию естественным или искусственным путем;
• не защищенный половой контакт;
• выявление микоплазмы spp. у полового партнера.

Исследование можно пройти самостоятельно в профилактических целях при ежегодной диспансеризации.

Особенности анализа

Для ПЦР исследования по выявлению микоплазмы присутствуют следующие особенности:

• для проведения анализа берут небольшое количество спермы, которую размещают в стерильный контейнер, чтобы не допустить воздействия посторонних микроорганизмов;
• перед анализом требуется пройти поэтапную подготовку, о которой предупреждает лечащий врач, чтобы получить максимально достоверные сведения;
• в ходе анализа выявляют генетический материал микроорганизма, то есть ДНК;
• из полученного образца извлекают небольшое количество генетического материала, который многократно копируют, чтобы получить достаточный объем для идентификации точного микроорганизма;
• с момента сбора образца до выдачи результатов максимально проходит 2-3 дня, ни один другой тест не способен определить наличие или отсутствие микроорганизма за такое короткое время, предоставив схожие точные данные.

Подготовку биоматериала осуществляет врач-лаборант, дальнейшую идентификацию микроорганизма проводит ПЦР-анализатор, который вычисляет данные в автоматическом режиме. При этом на мониторе выстраивается график, по которому уже можно отследить результат в режиме реального времени. Затем происходит распечатка бланка, где содержится информация о микроорганизме и его точном количестве.

Как выявляют Mycoplasma spp. методом ПЦР

Диагностическое исследование, проведенное с использованием современной и высокоточной методики полимеразной цепной реакции (ПЦР), позволяет выявить наличие в сперме искомой последовательности участка ДНК (нуклеиновой кислоты) микоплазмы. Аналитическая чувствительность метода намного выше бактериологического посева, важная особенность ПЦР-диагностики  - это качественный и количественный формат исследования. Качественный анализ используется для выявления наличия Mycoplasma spp., количественный тест - для уточнения диагноза и наблюдения за эффективностью проводимой противомикробной терапии.

Метод проведения

Первоначально у пациента собирают биоматериал, затем его сразу же отправляют в лабораторию, где приступают к ПЦР-анализу по этапам.

1. Разделение цепочки ДНК. Для разъединения цепочки необходимо разрушить водородные связи, для чего применяют нагревание до 96°.
2. Применение праймера. Первоначально снижают температуру до 45°, затем вводят реагент. Праймер присоединяется к участку ДНК, который подлежит идентификации.
3. Увеличение количества биоматериала. Температуру повышают до 72°. Затем многократно копируют фрагмент ДНК, в котором сосредоточен праймер.
4. Определение микроорганизма. Применяют ИФА-анализатор для оценки  разновидности ДНК микроорганизма, которая была многократно копирована.

Распечатанный лабораторный бланк передают пациенту. Если выявлены положительные сведения, с ними требуется проконсультироваться у врача. В данном случае это уролог или инфекционист.

Как подготовиться к анализу

Для проведения ПЦР диагностики спермы пациенту необходимо:

1. за 3 суток до собирания биоматериала воздержаться от интимной близости;
2. исключить прием антибактериальных и противомикробных средств, алкоголя, посещение сауны, бассейна, спортзала;
3. ограничить пищевые нагрузки, курение;
4. собрать сперму после мастурбации в стерильный контейнер.

Расшифровка анализа

Показатель нормы ПЦР диагностики спермы: Mycoplasma spp. не обнаружены - отрицательный результат, свидетельствует об отсутствии инфицированности.

Положительный результат - обнаружены Mycoplasma spp. - указывает на микоплазменную инфекцию. В данных исследования указывается количество бактерий в ГЭ/мл (Genome Equivalents - обозначение уровня содержания внеклеточной ДНК в 1 мл биоматериала): 1x10*3 ГE/мл, 2x10*3 ГE/мл.

Отрицательные сведения бывают в двух случаях:

• полное отсутствие инфекции в виде микоплазмы;
• успешно проведенная терапия, которая полностью уничтожила микроорганизм.

Положительные данные анализа бывают двух видов:

• присутствие минимального количества микроорганизма – успешно проведенное лечение, развитие воспалительного процесса по другим причинам при выявлении микоплазмы в качестве одного из компонентов нормальной условно-патогенной микрофлоры;
• присутствие большого объема микроорганизма – развитие воспалительного процесса вследствие микоплазмоза.

Важно помнить, что воспаление может вызвать не только микоплазма, но и другие микроорганизмы, присутствующие в половых путях.