Антитела к дифтерийному анатоксину

Анализ крови на антитела к дифтерийному анатоксину

Серологический анализ крови, в ходе выполнения которого определяется суммарный титр специфических антител к дифтерийному анатоксину, проводится для диагностирования дифтерии и оценивания напряженности иммунитета к ее возбудителю для решения вопроса о необходимости ревакцинации.

Дифтерия является острым инфекционным заболеванием, развитие которого вызывает Corynebacterium diphtheriae – токси-генная корине-бактерия, проникающая в человеческий организм аэрозольным путем. Инфекционно-воспалительный процесс характеризуется интоксикационным синдромом, поражением слизистых покровов верхнего отдела дыхательных путей и внутренних органов. Источник заражения – временный бактерио-носитель или больной дифтерией. Инкубационный период длится не более 4-х дней.

Основной фактор патогенности C. diphtheriae – вырабатываемый ею экзотоксин, с его воздействием на организм человека связаны клинические проявления инфекции и численность смертельных исходов заболевания. Для предотвращения распространенности дифтерии была разработана организованная иммунизация – именно благодаря этой системе удалость значительно снизить количество случаев заражения C. diphtheriae. При инфицировании у не привитых лиц развиваются тяжелые осложнения инфекционного процесса – отек гортани, нарушение функционирования сердечно-сосудистой, дыхательной, мочевыделительной и нервной систем.

Вакцина против дифтерии состоит из модифицированного бактериального токсина – токсоида. В результате его воздействия на человеческий организм, иммунная система производит специфические белки-иммуноглобулины, обеспечивающие защиту от инфекции. Для определения их концентрации в циркулирующей крови используют иммунологическое исследование.

В ответ на инфицирование организма C. Diphtheriae – возбудителем дифтерии или после введения вакцины дифтерийного анатоксина происходит выработка специфических антител – антитоксических защитных белков-иммуноглобулинов. Их обнаружение в крови при проведении серологического исследования свидетельствует о сформировавшемся естественном или поствакциональном иммунитете к дифтерии.

Когда делают анализ крови?

Анализ крови на противодифтерийные антитела необходим при:

• клиническом разграничении заболеваний, которые протекают со схожими клиническими признаками – инфекционного мононуклеоза, ангины, пара-тонзиллярного абсцесса, эпи-глотитта, острого ларинготрахеита;
• наличии у пациента симптоматики дифтерии;
• решении вопроса о целесообразности вакцинации либо ревакцинации;
• оценивании эффективности иммунизации против дифтерии.

Правила подготовки к анализу крови

Биологический материал – сыворотка, ее получают путем центрифугирования образца крови из вены. Венепункция производится в утренние часы (с 8.00 до 11.00), натощак. За сутки до процедуры пациенту следует исключить:

1. прием лекарственных средств;
2. пищевую, эмоциональную и физическую нагрузки;
3. распитие алкогольных напитков;
4. за двое суток до исследования нельзя допускать пищевых перегрузок, употреблять продукты с высокой жирностью. Такая пища может вызвать хилез крови и, как следствие, станет препятствием для проведения лабораторной диагностики;
5. последний прием пищи должен состояться не позже, чем за 8 часов до анализа. Употреблять рекомендуется продукты с низким содержанием калорий. В день сдачи крови можно лишь пить обыкновенную воду;
6. за час до получения пробы крови следует воздержаться от курения;
7. непосредственно перед процедурой забора образца крови 10-15 минут нужно посидеть в спокойном состоянии, исключив физическое и эмоциональное напряжение;
8. после прохождения курса антибактериальной терапии проходить исследование можно не ранее, чем по прошествии двух недель;
9. после флюорографии, рентгена, иных видов инструментального обследования, а также после массажа и физиопроцедур сдавать кровь рекомендуется не ранее, чем через одну неделю;
10. о фактах приема любого рода медикаментов требуется сообщать врачу.

Особенности проведения анализа

Проведение анализа назначают квалифицированные педиатры, терапевты, инфекционисты, ЛОР-врачи. При наличии характерной клинической картины дифтерийной инфекции тестирование должно выполняться дважды: в период с 1 по 3 сутки и затем в промежутке между 7 и 10 сутками, что позволяет оценить титр антител в динамике.

Если анализ направлен на оценку эффективности выработанного организмом поствакционального иммунитета, то исследование следует выполнять до введения вакцины и после проведенной вакцинации.

Методика

Забор крови проводит квалифицированный медицинский работник. Манипуляция выполняется строго в условиях кабинета, отвечающего санитарным требованиям. Процедура абсолютно безопасна и безболезненна для пациента. Кровь переносится в сухую стерильную медицинскую пробирку, с предварительно внесенным в нее антикоагулянтом. Исследование проводится иммуноферментным анализом. В основу данного метода лабораторной диагностики положена взаимодействие между антигенами и соответствующими им специфическими антителами, приводящее к формированию комплексов антиген-антитело. Исследование условно можно разделить на несколько этапов:

Центрифугирование. Пробирка с находящейся в ней пробой крови обследуемого размещается в специальном оборудовании, которое вращает ее на высокой скорости (1000 оборотов в минуту). После такой процедуры кровь распадается на форменные элементы и плазму, в которой, собственно, и сосредоточены искомые антитела.

Работа с планшетом. Отделенную плазму крови набирают при помощи медицинского шприца. Далее, также шприцом, плазму распределяют по лункам специального полистиролового планшета, используемого при проведении исследования. Наряду с плазмой, в лунки планшета также добавляется конъюгат, который содержит в себе антигены дифтерийного анатоксина. При наличии в плазме крови антител к C. Diphtheriae, они вступают во взаимодействие с антигенами.

Инкубация. Планшет отправляется в специальную аппаратуру, предназначенную для инкубации. Температура в данном приборе близка к температуре человеческого тела, благодаря чему процесс формирования иммунных комплексов, в случае присутствия в исследуемой плазме антител к дифтерийному анатоксину, будет происходить достаточно быстро.

Фотокалориметр. Фотокалориметр, применяемый на заключительной стадии проведения анализа, представляет собой прибор, который путем просвечивания биологической жидкости, выявляет антитела и автоматически подсчитывает их концентрацию, после чего выдает полученные значения на специальном бланке.

Расшифровка результата анализа

Титр антител, не превышающий 0,01 МЕд/мл свидетельствует о восприимчивости организма пациента к дифтерийной инфекции.

Количество иммуноглобулинов 0,1 МЕд/мл указывает на наличие слабого защитного уровня антител.

Титр суммарных Ig свыше 1,0 МЕд/мл является свидетельством стойкого иммунитета против Corynebacterium diphtheriae.

Положительный результат исследования указывает на текущую или перенесенную дифтерию, а также может свидетельствовать об успешно проведенной вакцинации против дифтерийной инфекции.

Отрицательный результат может явиться следствием давнего введения вакцины против дифтерии, неэффективности вакцинации, а также наблюдается у лиц, никогда не страдавших данным заболеванием.

Получение недостоверных значений

Иммуноферментный анализ считается достоверным способом лабораторной диагностики. Однако при этом точность результатов исследования зависит от самого обследуемого, а также от квалификации медицинского персонала. Так, получение недостоверных итоговых значений может быть вызвано рядом причин:

• отсутствие необходимой подготовки к предстоящему исследованию, пренебрежение рекомендациями специалиста;
• нарушения, допущенные при получении пробы крови и при ее дальнейшей транспортировки (использование загрязненной пробирки, отсутствие антикоагулянта, ненадлежащие условия хранения биологической жидкости);
• нарушение методики выполнения иммуноферментного анализа (добавление просроченного конъюгата, применение цельной венозной крови вместо отделенной в процессе центрифугирования плазмы).

Данные ошибки могут привести к получению как ложноотрицательных, так и ложноположительных значений. В первом случае патология, оставшись незамеченной, прогрессирует и может привести к появлению осложнений. Также ложноотрицательные результаты могут быть следствием нарушения работы иммунной системы обследуемого. Они могут иметь место при нарушениях иммунного ответа, когда в организме не происходит положенная выработка специфических антител в ответ на внедрение в него C. Diphtheriae.