Антиген Лямблий в фекалиях ELISA ИФА
Алексеев Андрей Викторович
Врач клинической лабораторной диагностики,
Выявление антигена Лямблий в фекалиях методом ELISA ИФА
Иммуноферментный анализ (ИФА, синоним англ. - ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay) проводят для быстрого качественного выявления антигена Лямблий в образцах кала человека с целью диагностики лямблиоза.
Лямблиоз - заболевание пищеварительной системы, возбудителем является протозойный одноклеточный организм Giardia lamblia.
Жизненный цикл лямблий состоит из стадии цист и вегетативной стадии (трофозоит). При попадании цист в организм они минуют желудок и под воздействием дуоденального содержимого в верхнем отделе кишечника высвобождаются подвижные трофозоиты (они способны к размножению и существованию в тонком кишечнике). В определенных условиях трофозоиты теряют свою форму и вновь образуют стадию цисты, находящуюся в покое. Заканчивается цикл, когда зрелые цисты (размером 12 мкм и овальной формы) попадают с калом во внешнюю среду и способны заразить нового хозяина.
Показания для проведения анализа
Причиной для назначения анализа являются симптомы лямблиоза:
- психосоматические нарушения;
- хронические заболевания, поражение ЖКТ;
- аллергические реакции, дерматит, экзема, крапивница;
- дисбактериоз, диарея неустановленной этиологии;
- отставание в физическом развитии, гипотрофия.
- выявления паразитоносителей;
- обнаружения лямблиоза острых и хронических форм;
- дифференцированной диагностики заболеваний с похожими клиническими симптомами (вирусная или бактериальная диарея);
- контроля за эффективностью лечением лямблиоза ( через неделю после ее окончания).
Методика проведения анализа
Особых подготовок для проведения анализа не требуется. Необходимо собрать биоматериал - кал. Его помещают в стерильный контейнер. Образец следует брать из нескольких участков, в малых количествах.
В процессе исследования при первом посеве, антитела, добавленные в образец, притягивают антигены лямблии, находящиеся в каловых массах. При второй инкубации, дополнительный вид антител зажимают антиген паразита между собой. В последующей инкубации удаляются дополнительные антитела, не проявившие реакцию при помощи конъюгата и анти-антител и пероксидазы. Затем, из материала удаляются несвязанные ферменты с помощью промывки, и включают хромоген, который дает синее окрашивание при взаимодействии с ферментативным комплексом и пероксидом. Стоп-раствором реакция тормозится и происходит изменение цвета с синего на желтый.
В процессе исследования при первом посеве, антитела, добавленные в образец, притягивают антигены лямблии, находящиеся в каловых массах. При второй инкубации, дополнительный вид антител зажимают антиген паразита между собой. В последующей инкубации удаляются дополнительные антитела, не проявившие реакцию при помощи конъюгата и анти-антител и пероксидазы. Затем, из материала удаляются несвязанные ферменты с помощью промывки, и включают хромоген, который дает синее окрашивание при взаимодействии с ферментативным комплексом и пероксидом. Стоп-раствором реакция тормозится и происходит изменение цвета с синего на желтый.
Интерпретация результата анализа
Расшифровку результатов диагностирования проводят визуальную и при помощи ридер контроля.
1.Визуальная.
При положительном результате лунка материала имеет более темный желтый цвет, чем окрас лунки с отрицательным контроллером. В случае отрицательного результата, окрас лунки исследуемого образца светлее желтого цвета.
2. Ридер контроль.
Необходимо обнулить считыватель в ноль. Считать все лунки при 450/620-650 нм. При положительном результате абсорбция будет считывать от 0,08 ед. ОП и выше. Это указывает на наличие антигена лямблии. Отрицательный результат покажет считывание абсорбции менее 0,08 ед. ОП. Что подтверждает отсутствие содержания определяемых уровней антигена лямблии.
Паразиты имеют более плотное содержание в организме в период первых 7 дней, с момента появления симптоматики лямблиоза. Именно в этот период исследование образцов кала целесообразно.