Антиген Лямблий в фекалиях ELISA ИФА

Алексеев Андрей Викторович
Алексеев Андрей Викторович Врач клинической лабораторной диагностики,

Выявление антигена Лямблий в фекалиях методом ELISA ИФА


Лямблиоз.

Иммуноферментный анализ (ИФА, синоним англ. - ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay) проводят для быстрого качественного выявления антигена Лямблий в образцах кала человека с целью диагностики лямблиоза.

Лямблиоз - заболевание пищеварительной системы, возбудителем является протозойный одноклеточный организм Giardia lamblia.

Жизненный цикл лямблий состоит из стадии цист и вегетативной стадии (трофозоит). При попадании цист в организм они минуют желудок и под воздействием дуоденального содержимого в верхнем отделе кишечника высвобождаются подвижные трофозоиты (они способны к размножению и существованию в тонком кишечнике). В определенных условиях трофозоиты теряют свою форму и вновь образуют стадию цисты, находящуюся в покое. Заканчивается цикл, когда зрелые цисты (размером 12 мкм и овальной формы) попадают с калом во внешнюю среду и способны заразить нового хозяина.


Показания для проведения анализа


Психосамотические нарушения при лямблиозе

Причиной для назначения анализа являются симптомы лямблиоза:

  • психосоматические нарушения;
  • хронические заболевания, поражение ЖКТ;
  • аллергические реакции, дерматит, экзема, крапивница;
  • дисбактериоз, диарея неустановленной этиологии;
  • отставание в физическом развитии, гипотрофия.
Антиген Лямблий определяется для:
  • выявления паразитоносителей;
  • обнаружения лямблиоза острых и хронических форм;
  • дифференцированной диагностики заболеваний с похожими клиническими симптомами (вирусная или бактериальная диарея);
  • контроля за эффективностью лечением лямблиоза ( через неделю после ее окончания).

Методика проведения анализа


Особых подготовок для проведения анализа не требуется. Необходимо собрать биоматериал - кал. Его помещают в стерильный контейнер. Образец следует брать из нескольких участков, в малых количествах.

В процессе исследования при первом посеве, антитела, добавленные в образец, притягивают антигены лямблии, находящиеся в каловых массах. При второй инкубации, дополнительный вид антител зажимают антиген паразита между собой. В последующей инкубации удаляются дополнительные антитела, не проявившие реакцию при помощи конъюгата и анти-антител и пероксидазы. Затем, из материала удаляются несвязанные ферменты с помощью промывки, и включают хромоген, который дает синее окрашивание при взаимодействии с ферментативным комплексом и пероксидом. Стоп-раствором реакция тормозится и происходит изменение цвета с синего на желтый.

Интерпретация результата анализа


Анализ на определение антигена Лямблий в фекалиях.

Расшифровку результатов диагностирования проводят визуальную и при помощи ридер контроля.

1.Визуальная.
При положительном результате лунка материала имеет более темный желтый цвет, чем окрас лунки с отрицательным контроллером. В случае отрицательного результата, окрас лунки исследуемого образца светлее желтого цвета.

2. Ридер контроль.
Необходимо обнулить считыватель в ноль. Считать все лунки при 450/620-650 нм. При положительном результате абсорбция будет считывать от 0,08 ед. ОП и выше. Это указывает на наличие антигена лямблии. Отрицательный результат покажет считывание абсорбции менее 0,08 ед. ОП. Что подтверждает отсутствие содержания определяемых уровней антигена лямблии.

Паразиты имеют более плотное содержание в организме в период первых 7 дней, с момента появления симптоматики лямблиоза. Именно в этот период исследование образцов кала целесообразно.