Антиген Лямблий в фекалиях ELISA ИФА

Выявление антигена Лямблий в фекалиях методом ELISA ИФА

Иммуноферментный анализ (ИФА, синоним англ. - ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay) проводят для быстрого качественного выявления антигена Лямблий в образцах кала человека с целью диагностики лямблиоза. Лямблиоз - заболевание пищеварительной системы, возбудителем является протозойный одноклеточный организм Giardia lamblia.

Жизненный цикл лямблий состоит из стадии цист и вегетативной стадии (трофозоит). При попадании цист в организм они минуют желудок и под воздействием дуоденального содержимого в верхнем отделе кишечника высвобождаются подвижные трофозоиты (они способны к размножению и существованию в тонком кишечнике). В определенных условиях трофозоиты теряют свою форму и вновь образуют стадию цисты, находящуюся в покое. Заканчивается цикл, когда зрелые цисты (размером 12 мкм и овальной формы) попадают с калом во внешнюю среду и способны заразить нового хозяина.

Показания для проведения анализа

Причиной для назначения анализа являются симптомы лямблиоза:

• психосоматические нарушения;
• хронические заболевания, поражение ЖКТ;
• аллергические реакции, дерматит, экзема, крапивница;
• дисбактериоз, диарея неустановленной этиологии;
• отставание в физическом развитии, гипотрофия.

Антиген Лямблий определяется для:

• выявления паразитоносителей;
• обнаружения лямблиоза острых и хронических форм;
• дифференцированной диагностики заболеваний с похожими клиническими симптомами (вирусная или бактериальная диарея);
• контроля за эффективностью лечением лямблиоза ( через неделю после ее окончания).

Методика проведения анализа

Особых подготовок для проведения анализа не требуется. Необходимо собрать биоматериал - кал. Его помещают в стерильный контейнер. Образец следует брать из нескольких участков, в малых количествах.

В процессе исследования при первом посеве, антитела, добавленные в образец, притягивают антигены лямблии, находящиеся в каловых массах. При второй инкубации, дополнительный вид антител зажимают антиген паразита между собой. В последующей инкубации удаляются дополнительные антитела, не проявившие реакцию при помощи конъюгата и анти-антител и пероксидазы. Затем, из материала удаляются несвязанные ферменты с помощью промывки, и включают хромоген, который дает синее окрашивание при взаимодействии с ферментативным комплексом и пероксидом. Стоп-раствором реакция тормозится и происходит изменение цвета с синего на желтый.

Интерпретация результата анализа

Расшифровку результатов диагностирования проводят визуальную и при помощи ридер контроля.

1. Визуальная. При положительном результате лунка материала имеет более темный желтый цвет, чем окрас лунки с отрицательным контроллером. В случае отрицательного результата, окрас лунки исследуемого образца светлее желтого цвета.
2. Ридер контроль. Необходимо обнулить считыватель в ноль. Считать все лунки при 450/620-650 нм. При положительном результате абсорбция будет считывать от 0,08 ед. ОП и выше. Это указывает на наличие антигена лямблии. Отрицательный результат покажет считывание абсорбции менее 0,08 ед. ОП. Что подтверждает отсутствие содержания определяемых уровней антигена лямблии.

Паразиты имеют более плотное содержание в организме в период первых 7 дней, с момента появления симптоматики лямблиоза. Именно в этот период исследование образцов кала целесообразно.

Что такое лямблиоз

Лямблиоз относится к заболеваниям, вызываемым патогенными простейшими и протекающим с нарушением функции пищеварения. Поражение происходит преимущественно на уровне тонкого кишечника, где паразит нарушает процессы пристеночного пищеварения.  В клинике лямблиоза ведущим выступает гастроинтестинальный синдром с проявлениями диспепсического характера. Лабораторная диагностика является важным методом подтверждения патологического процесса, позволяющая своевременно начать лечение заболевания.

Причины лямблиоза

Возбудителем инфекции являются лямблии, представляющие собой одноклеточных паразитов, относящихся к классу жгутиковых. В кишечнике человека могут присутствовать в 2-х формах, то есть в вегетативной (в виде трофозоитов) и споровой (в виде цист). Трофозоиты обитают в верхних отделах тонкого кишечника.

Паразит имеет осмотический тип питания, то есть всасывает пищу, переваренную хозяином, всей поверхностью тела. Такая жизнедеятельность лямблий нарушает функцию пищеварения и провоцируют развитие патологической симптоматики. В форме цист лямблии обитают в толстом кишечнике и во внешней среде. Отличаются жизнеспособностью и устойчивостью к ультрафиолетовому излучению и действию низких температур.

Пути передачи инфекции

Источником заражения лямблиозом служит больной человек или паразитоноситель, который выделяет с испражнениями цисты лямблий во внешнюю среду. Механизм передачи инфекции — фекально-оральный. 

Чаще всего передача возбудителя болезни осуществляется через:

• бытовые предметы общего пользования;
• водопроводную воду, инфицированную цистами лямблий;
• немытые овощи и фрукты;
• при недостаточной термической обработки продуктов питания;
• при нарушении правил санитарии, особенно в дошкольных и школьных учреждениях.

Не последнее место в переносе лямблий принадлежит насекомым (мухи, тараканы), а также животным (кошки, собаки). Они являются механическими переносчиками паразита, который находится на их теле, лапах, шерсти.

На факт заражения лямблиями влияет иммунная реактивность кишечника. Возможна невосприимчивость организма к паразиту. Цисты, попавшие в пищеварительный тракт и встретившие агрессивную среду кишечника, проходят его и выделяются наружу в неизменном виде. Заболевания ЖКТ, сопровождающиеся пониженной кислотностью и снижением ферментативной активности, повышают риск заражения.

Классификация лямблиоза

Цисты лямблий, попадая в ЖКТ, достигают 12-ти перстной и проксимального отдела тощей кишки, где превращаются в вегетативную форму, прикрепляясь к ворсинам эпителия. Механическое воздействие паразита на слизистую кишечника провоцирует нарушение всасывания, раздражение нервных окончаний кишечной трубки, изменение морфологического строения клеточных структур оболочки кишечника.

В процессе жизнедеятельности паразит выделяет специфический токсин, оказывающий негативное влияние на нервную систему. Такое действие лямблий изменяет функцию ЖКТ и провоцирует появление патологической симптоматики. По клиническим проявлениям лямблиоза, различают следующие его формы:

• кишечную — протекает с развитием дуоденита, гастроэнтерита, энтерита, дуодено-гастрального рефлюкса, функционального расстройства кишечника;
• билиарно-панкреатическую — с преобладанием явлений дискинезии желчевыводящих путей, холецистита, холангита, реактивного панкреатита;
• внекишечную — протекает с явлениями нейроциркуляторной дистонии, астено-невротическим синдромом, токсико-аллергическими проявлениями.

По своему течению и выраженности патологической симптоматики лямблиоз может иметь острое или хроническое течение.

Симптомы лямблиоза

Дебют заболевания происходит спустя 1-3 недели после попадания лямблий в организм и окончания инкубационного периода. Так как возбудитель паразитирует в кишечнике, клинические проявления в острой стадии типичного течения патологии начинаются с поражения ЖКТ и нарушения его функции, проявляющейся следующей симптоматикой:

• болевыми ощущениями умеренной интенсивности — боль наблюдается, чаще всего, в области пупка и правом подреберье. По своему характеру она может быть схваткообразной, напоминающей приступ аппендицита, или тянущей;
• диспепсическими расстройствами — тошнотой, периодической рвотой, снижением аппетита, отрыжкой, чувством тяжести в животе, иногда повышением температуры до субфебрильных значений;
• нарушением стула — консистенция испражнений приобретает жидкий, пенистый и водянистый характер с неприятным запахом. Кратность стула возрастает до 3-х-5-ти раз в сутки. Часто диарея сменяется запорами.

Острая фаза паразитарной инфекции длится до 1 недели. По окончании этого срока, клинические симптомы лямблиоза могут купироваться и наступить самоизлечение. Если клиника сохраняется, патологический процесс переходит в подострое хроническое течение.

Массивность инвазии паразита, длительность и тяжесть течения инфекционного процесса влияют на степень синдрома интоксикации организма. 

Он может проявляться:

• влиянием на ЦНС — угнетение нервной системы сопровождается астено-невротическим синдромом (слабость, раздражительность, неустойчивость эмоционального фона, снижение трудоспособности);
• дерматологическими проявлениями — развивается сухость и шелушение кожи, появляется фолликулярный кератоз, крапивница, сопровождающаяся кожным зудом, атопический дерматит;
• влиянием на зрительный анализатор — проявляется блефаритом, конъюнктивитом, хейлитом (воспалительный процесс, поражающий красную кайму, слизистую оболочку и кожу губ), которые склонны к длительному и упорному течению.

На фоне лямблиоза пациенты, страдающие заболеванием дыхательной системы (бронхиальная астма, астматический бронхит), отмечают продолжительность течения обострений и сокращение периода ремиссии.

Диагностика лямблиоза

Так как паразитарная инфекция отличается разнообразием клинических проявлений, на первое место в диагностике выходят серологические тесты по определению антигена лямблий в кишечном содержимом.

Своевременное обнаружение паразита в организме и лечение лямблиоза, даст возможность предупредить и избежать перехода заболевания в хроническую форму, устранить патологическую симптоматику и восстановить функцию пищеварительной системы.